nm23-H-,1-基因轉(zhuǎn)染人膀胱癌T-24細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討電穿孔基因技術(shù)將腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1導(dǎo)入人膀胱癌T-24細(xì)胞株的方法和合適條件，建立穩(wěn)定、高效的基因轉(zhuǎn)移方法。研究nm23-H1對(duì)膀胱癌T-24細(xì)胞株侵襲能力、粘附能力和趨化運(yùn)動(dòng)能力等腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移特性的影響。探討nm23-H1轉(zhuǎn)染對(duì)膀胱癌T-24細(xì)胞株化療敏感性的影響。 方法：利用電穿孔介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)，完成轉(zhuǎn)染方法的建立。利用免疫組化技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中nm23-H1的蛋白產(chǎn)物核苷二磷酸激

2、酶A(NDPKA)的表達(dá)。利用Transwell小室和沖刷實(shí)驗(yàn)，觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的侵襲、粘附、趨化運(yùn)動(dòng)能力的變化。采用MTT法觀察nm23-H1轉(zhuǎn)染對(duì)膀胱癌T-24細(xì)胞化療敏感性的影響。 結(jié)果：使用重組的pCMV-Neo-Bam真核表達(dá)載體，將nm23-H1轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞，G418篩選并獲得穩(wěn)定表達(dá)。膀胱癌T-24細(xì)胞株轉(zhuǎn)染nm23-H1基因前后蛋白表達(dá)水平有明顯差異，轉(zhuǎn)染后T-24細(xì)胞侵襲、粘附、趨化運(yùn)動(dòng)能力均顯著降低(P＜0

3、.05)，轉(zhuǎn)染前后侵襲細(xì)胞相對(duì)數(shù)目分別為65.60％±3.16％和33.93％±2.61％(P＜0.05)；轉(zhuǎn)染前后趨化運(yùn)動(dòng)細(xì)胞相對(duì)數(shù)目分別為70.66％±3.81％和47.95％±3.51％(P＜0.05)。轉(zhuǎn)染前后T-24細(xì)胞株對(duì)阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氨甲喋呤(MTX)的化療敏感性無顯著差異(P＞0.05)，轉(zhuǎn)染后T-24細(xì)胞株對(duì)順鉑(CDDP)明顯增敏(P＜0.05)。 結(jié)論：nm23-H1轉(zhuǎn)染對(duì)膀胱