Akt抑制劑魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞生長的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的:研究Akt抑制劑魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞株生長的影響,并初步探討其可能的作用機(jī)制;以及探討Akt抑制劑與傳統(tǒng)的化療藥物順鉑、紫杉醇等聯(lián)合應(yīng)用對膀胱癌T-24細(xì)胞株的抑制作用,為Akt抑制劑魚藤素靶向治療膀胱癌以及抑制PI3K/Akt信號通路提高膀胱癌的化療效果提供相應(yīng)的理論依據(jù)。
　　方法:(1)用MTT法檢測Akt抑制劑魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞的抑制效應(yīng),以及用倒置顯微鏡觀察魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響;(2

2、)用DNA片段化檢測Akt抑制魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞凋亡的影響;(3)用細(xì)胞劃痕愈合試驗檢測Akt抑制魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞遷移能力的影響;(4)用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度的Akt抑制劑魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞周期的影響;(5)用RT-PCR法檢測Akt抑制劑魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞中MDM2、GSK3β mRNA表達(dá)的影響;(6)用蛋白印跡法檢測Akt抑制劑魚藤素對膀胱癌T-24細(xì)胞中MDM2、GSK3β蛋白表達(dá)的影響;(7

3、)分別用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)檢測Akt抑制劑魚藤素與傳統(tǒng)化療藥物順鉑、紫杉醇單獨(dú)以及聯(lián)合應(yīng)用對膀胱癌T-24細(xì)胞的抑制效應(yīng)。
　　結(jié)果:(1)MTT法結(jié)果顯示Akt抑制劑魚藤素可顯著抑制膀胱癌T-24細(xì)胞的增殖,且其抑制率呈時間、藥物濃度依賴性;倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示魚藤素處理后的膀胱癌T-24細(xì)胞呈現(xiàn)皺縮、空泡、縮小、脫壁等相應(yīng)增殖變緩的形態(tài)學(xué)改變;(2)DNA片段化結(jié)果顯示魚藤素可誘導(dǎo)膀胱癌T-24細(xì)胞的凋亡;(3)劃痕愈合實

4、驗結(jié)果顯示,Akt抑制劑魚藤素可降低T-24細(xì)胞的遷移能力;(4)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與對照組比較,魚藤素使膀胱癌T-24細(xì)胞G0/G1期所占比例增加,S期比例減少,使周期主要阻滯在G0/G1期,從而顯著抑制膀胱癌T-24細(xì)胞的增殖;(5)RT-PCR結(jié)果顯示,魚藤素處理膀胱癌T-24細(xì)胞后使MDM2 mRNA的表達(dá)水平下降,而使GSK3βmRNA的表達(dá)水平增加;(6)蛋白印跡法檢測發(fā)現(xiàn)魚藤素下調(diào)了MDM2蛋白的表達(dá),上調(diào)了GSK3β蛋

5、白的表達(dá);(7)MTT法、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示魚藤素與傳統(tǒng)的化療藥物順鉑、紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用可顯著的抑制膀胱癌T-24細(xì)胞的生長,并能顯著的提高傳統(tǒng)化療藥物的療效。
　　結(jié)論:Akt抑制劑魚藤素能夠顯著抑制膀胱癌T-24細(xì)胞的增殖,并可誘導(dǎo)其凋亡以及影響其遷移,阻滯細(xì)胞的周期,其機(jī)制可能與影響Akt通路下游信號分子MDM2以及GSK3β的表達(dá)相關(guān);并且Akt抑制劑魚藤素能夠顯著提高傳統(tǒng)化療藥物順鉑、紫杉醇對膀胱癌T-24細(xì)胞的殺傷作用。