化療藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡對熱休克蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、研究目的：通過建立肝癌細(xì)胞化療藥物敏感性檢測方法，探索不同敏感度化療藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402凋亡的作用，以及對免疫刺激“危險信號”熱休克蛋白HSP70表達(dá)的影響，為建立肝癌的化學(xué)免疫治療新方法提供理論與實驗依據(jù)。 研究方法：以人肝癌細(xì)胞株BEL-7402為研究對象。通過Hoechst33342染色和熒光顯微鏡觀察化療藥物誘導(dǎo)BEL-7402細(xì)胞凋亡后的形態(tài)學(xué)變化；分別以MTT比色法和三磷酸腺苷生物發(fā)光法(ATP-TCA

2、)檢測BEL-7402細(xì)胞對不同化療藥物的敏感性，采用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測細(xì)胞凋亡；利用直接免疫熒光標(biāo)記與流式細(xì)胞術(shù)方法檢測不同敏感度化療藥物作用下BEL-7402細(xì)胞HSP70表達(dá)的情況。 實驗結(jié)果：1.形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果化療藥物可以引起肝癌細(xì)胞株BEL-7402凋亡的典型形態(tài)學(xué)變化，以藥物處理48h時最為明顯。 2.MTT法檢測化療藥物對細(xì)胞的抑制作用對肝癌細(xì)胞株BEL-7402抑制作用較強(qiáng)的藥物是足葉乙甙、表阿霉素、泰素

3、等藥物，抑制作用較弱的藥物是5-FU、絲裂霉素、卡鉑等藥物。足葉乙甙、表阿霉素、泰素、健擇、長春新堿、草酸鉑六種藥物在三種不同濃度下對肝癌細(xì)胞株BEL-7402的抑制率均高于順鉑、5FU、絲裂霉素、卡鉑四種藥物，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 3.ATP-TCA法檢測肝癌細(xì)胞株BEL-7402對化療藥物的敏感性肝癌細(xì)胞株BEL-7402敏感的藥物為：足葉乙甙、表阿霉素；中度敏感的藥物為：健擇、長春新堿；耐藥的藥物為：絲裂霉素

4、、卡鉑。藥敏檢測結(jié)果與MTT檢測結(jié)果相符合。 4.流式細(xì)胞儀檢測化療藥物誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡敏感組藥物(足葉乙甙、表阿霉素)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402的凋亡比率顯著高于中度敏感組(健擇、長春新堿)與耐藥組(絲裂霉素、卡鉑)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。敏感組、中度敏感組、耐藥組藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402的凋亡比率顯著高于對照組(P＜0.05)。 5.免疫熒光與流式細(xì)胞術(shù)檢測肝癌細(xì)胞株BEL-7402HSP

5、70表達(dá)情況直接免疫熒光標(biāo)記結(jié)果顯示，熱休克組與敏感組肝癌細(xì)胞株BEL-7402熒光強(qiáng)度強(qiáng)于耐藥組(絲裂霉素、卡鉑)與對照組；耐藥組肝癌細(xì)胞株BEL-7402熒光強(qiáng)度與對照組差別不大。 FCM檢測結(jié)果顯示，敏感組肝癌細(xì)胞HSP70表達(dá)高于耐藥組與對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；且足葉乙甙誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HSP70表達(dá)顯著高于熱休克組(P＜0.05)；耐藥組、對照組間HSP70表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

6、結(jié)論：綜合上述實驗結(jié)果，可以得出以下結(jié)論：1.MTT比色法可以很好的應(yīng)用于化療藥物對肝癌細(xì)胞株BEL-7402抑制作用的評價，與ATP-TCA法有很好的一致性。 2.化療藥物可以有效誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402細(xì)胞凋亡。敏感組藥物對肝癌細(xì)胞株BEL-7402凋亡的誘導(dǎo)作用顯著強(qiáng)于中度敏感組與耐藥組藥物。肝癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。 3.本課題首次研究并發(fā)現(xiàn)化療藥物可以有效誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402