抗腫瘤活性物SYUIQ-5在大鼠體內的藥動學研究.pdf

1、在新藥研究過程中若能獲得藥物代謝酶選擇性催化作用信息和代謝作用機理以及藥物對酶的誘導或抑制作用，則可預測藥物在體內發(fā)生相互作用的可能性，從而大大減少上市后因可能嚴重相互作用而被淘汰的巨大風險，對臨床安全、合理、有效用藥，避免不良反應具有重要的指導意義，同時也為新藥的分子設計提供思路和依據(jù)。 SYUIQ-5是由中山大學藥學院最新合成的吲哚喹啉類衍生物，具有誘導染色體端粒的-TTAGGG-重復序列形成穩(wěn)定的G-四鏈體的作用，SYUI

2、Q-5能抑制人白血病K562細胞和人結腸癌SW620細胞中的端粒酶使端粒變短，從而使癌細胞停止生長直至衰老死亡而發(fā)揮抗腫瘤作用，動物體內實驗也觀察到明顯的抗腫瘤作用。雖然我們得知SYUIQ-5具有抗腫瘤作用，但缺乏其藥動學方面的資料，所以本文的工作旨在對SYUIQ-5臨床前藥代動力學過程，吸收特點，參與SYUIQ-5代謝的P450亞酶以及SYUIQ-5對P450的影響進行研究，以支持人的藥代動力學研究并為臨床用藥提供參考。 主要

3、工作包括以下六個部分： 第一部分.測定大鼠血漿中SYUIQ-5的HPLC方法的建立 目的：建立測定大鼠血漿中SYUIQ-5的HPLC方法。 方法：血漿樣品以氯化氨緩沖液(pH=10.0)堿化后用乙醚提取其中的SYUIQ-5和內標SUCL。色譜條件：HypersilBDSC18柱(5μm，4.6mm×150mm)；流動相：30mmol·L-1磷酸氫二鉀緩沖液(pH=8.0)-甲醇-三乙胺(30∶70∶0.05，v/

4、v/v)；流量為1mL·min-1；柱溫：室溫；紫外檢測波長：278nm。 結果：線性范圍為30～1500μg·L-1，線性關系良好，相關系數(shù)為0.9990，最低檢測限為20μg·L-1，日內RSD≤5.2％，日間RSD≤3.8％；提取回收率72.1％～80.5％(n=5)，相對回收率在96.8％～105.1％范圍內。 結論：本方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，精密度和準確性高，符合生物樣品檢測方法的要求，為SYUIQ-5藥代動力

5、學研究提供可靠的檢測方法。 第二部分.SYUIQ-5在大鼠體內的藥代動力學研究 目的：考察單次腹腔注射后SYUIQ-5在大鼠體內的藥動學特征。 方法：雄性SD大鼠單次腹腔注射15，30和60mg·kg-1三種劑量的SYUIQ-5后，在不同的時間取血，離心(10000r·p-1，10min)，取血漿，用上述HPLC方法檢測其濃度，使用3p87軟件分析結果。 結果：15，30和60mg·kg-1三劑量組的Cm

6、ax分別為142.75、190.88、336.41ng·mL-1(比例為1：1.4：2.4)，AUC分別為12739.44、17877.75、42454.98ng·min-1·mL-1(比例為1：1.4：3.3)，Cmax和AUC與劑量成比例；t1/2分別為60.62、55.75、75.94min，各劑量組給藥后CL/F分別為1.18、1.68、1.41L·min-1·kg-1，V/F分別為102.98、134.98、154.85L·k

7、g-1，各劑量組間無顯著性差異(p＞0.05)。 結論：單次腹腔注射SYUIQ-5在大鼠體內的藥動學過程呈線性動力學特征，符合一室模型。 第三部分.SYUIQ-5在Caco-2細胞模型中的轉運特點 目的：考察SYUIQ-5在Caco-2細胞模型中的轉運特點。 方法：用Caco-2細胞單層模型研究SYUIQ-5的雙向轉運，并考察時間，SYUIQ-5濃度，溫度，能量抑制劑和P-gp抑制劑對SYUIQ-5吸收的

8、影響。用高效液相色譜法檢測SYUIQ-5在不同濃度，不同時間，不同溫度，以及有無能量抑制劑和P-gp抑制劑的情況下的吸收濃度，以計算其表觀滲透系數(shù)(Paap)。 結果：在Caco-2細胞模型中，SYUIQ-5從單層細胞層頂端(AP)到基底端(BL)的轉運呈時間和濃度依賴性，能量抑制劑及低溫能減小Paap，而P-gp抑制劑能促進SYUIQ-5的轉運。另一方面，SYUIQ-5從單層細胞層基底端(BL)到頂端(AP)的轉運沒有濃度依賴

9、性，不受溫度，能量抑制劑和P-gp抑制劑的影響。 結論：在Caco-2細胞模型中，SYUIQ-5從單層細胞層頂端(AP)到基底端(BL)的轉運主要是由位于Caco-2細胞單層頂端(AP)的載體介導的主動轉運，且受到P-gp的影響，這可能是導致其吸收差的原因之一。 第四部分.SYUIQ-5在鼠肝微粒體中的代謝及其代謝物的初步確證(1)SYUIQ-5在鼠肝微粒體中的代謝 目的：建立HPLC測定大鼠肝微粒體中SYUIQ

10、-5的方法，確定參與SYUIQ-5代謝的P450亞酶。 方法：對SYUIQ-5在不同誘導劑β-萘黃酮(80mg·kg-1·d-1,3d)，苯巴比妥(80mg·kg-1·d-1，3d)，地塞米松(100mg·kg-1·d-1,4d)，20％乙醇(5mL·kg-1·d-1,4d)，SYUIQ-5(5mg·kg-1·d-1,5d)和空白對照(生理鹽水5mL·kg-1·d-1，5d或植物油2mL·kg-1·d-1，3d)處理的鼠肝微粒體

11、中以及在加入各個CYP亞酶抑制劑的空白大鼠肝微粒體中的代謝進行了研究。 結果：發(fā)現(xiàn)地塞米松(Dex)和β-萘黃酮(β-NF)能增加SYUIQ-5的代謝，酮康唑能抑制SYUIQ-5的代謝。 結論：在SYUIQ-5的代謝中，CYP3A1起主要作用，CYP1A1起次要作用。 (2)SYUIQ-5在鼠肝微粒體中代謝物的初步確證 目的：初步推測SYUIQ-5在大鼠肝微粒體中的代謝物。 方法：SYUIQ-5(

12、終濃度3μg·mL-1)在肝微粒體孵育體系(總體積500μL，大鼠肝微粒體終濃度3mg·mL-1，磷酸鹽緩沖液pH=7.4)37℃水浴中預溫孵5min后，向其中加入NADPH溶液(終濃度1mM)，孵育20min后加入冰冷的乙醚2mL，迅速混合，以終止反應，渦旋振蕩2分鐘，離心(4000r.min-1)10分鐘，吸取有機相，負壓揮干，以HPLC和LC/MS/MS進行分析。 結果：樣品HPLC色譜圖上發(fā)現(xiàn)有代謝物的色譜峰，采用LC/

13、MS/MS綜合分析代謝產(chǎn)物的準分子離子，二級碎片離子和色譜保留時間，確定SYUIQ-5在大鼠肝微粒體中有2個代謝物產(chǎn)生。 結論：確定SYUIQ-5在大鼠肝微粒體中的代謝物為吲哚喹啉母核側鏈末端叔胺發(fā)生了N-去甲基化和N-氧化的產(chǎn)物。 第五部分.SYUIQ-5對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶基因，蛋白表達和酶活性的影響 (1)SYUIQ-5對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶基因，蛋白表達的影響目的：考察SYUIQ-5

14、對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶基因和蛋白表達的影響。方法：SYUIQ-5分3個劑量0.1mg·kg-1，5mg·kg-1，10mg·kg-1，雄性SD大鼠經(jīng)腹腔注射連續(xù)處理5天后，取肝組織，制備肝微粒體和提取總RNA，分別應用反轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和免疫印跡雜交(Westernblot)法，檢測CYP3A1，2B1/2，1A1，2E1mRNA和蛋白的表達。結果：與空白對照組相比，SYUIQ-5可顯著誘導CYP1A1mR

15、NA和蛋白的表達，對CYP3A1，2B1/2和2E1mRNA和蛋白表達無影響。結論：SYUIQ-5可顯著誘導CYP1A1mRNA和蛋白的表達。 (2)SYUIQ-5對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶活性的影響 目的：考察SYUIQ-5對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶活性的影響。 方法：SYUIQ-5分3個劑量0.1mg·kg-1，5mg·kg-1，10mg·kg-1，雄性SD大鼠經(jīng)腹腔注射連續(xù)處理1，5和10天后，

16、取肝組織，制備肝微粒體，應用HPLC法檢測CYP3A1，2B1/2，1A1，1A2和2E1的酶活性。 結果：與空白對照組相比，SYUIQ-5可顯著誘導CYP1A1和CYP1A2的酶活性，對CYP3A1，2B1/2和2E1的酶活性無影響。 結論：SYUIQ-5可顯著誘導CYP1A1和CYP1A2的酶活性。 第六部分.SYUIQ-5和SYUIQ-5衍生物F318大鼠口服吸收比較 目的：大鼠一次性灌胃相同劑量(

17、60mg.kg-1)的SYUIQ-5和F318后，比較二者的吸收情況。 方法：雄性SD大鼠一次性灌胃60mg·kg-1SYUIQ-5和F318后，在不同的時間取血，離心(10000r·min-1，10min)，取血漿，加內標，以氯化氨緩沖液(pH=10.0)堿化后用乙醚提取其中的SYUIQ-5和內標SUCL，揮干，用HPLC分析。 結果：SYUIQ-5和F318的Cmax分別為56.21、301.15μg·L-1(1：5