哮喘發(fā)作患者外周血嗜酸細胞差異表達基因克隆及特性研究.pdf

1、研究背景:支氣管哮喘(簡稱哮喘)是常見的慢性疾病，目前認為哮喘是多種類型細胞控制和參與的以氣道炎癥、氣道重建及氣道反應性增高為主要特征的慢性非特異性炎癥。由于哮喘臨床表型及對治療反應的不均一性，哮喘更像是一種綜合征，而不是一個特殊的疾病實體。哮喘一直是全球關注的一個重要疾病，對哮喘的發(fā)病機制的研究也在不斷地深入。當前哮喘的基礎研究涉及諸多領域，包括哮喘的遺傳學基礎、環(huán)境因素與哮喘、免疫機制及免疫治療、氣道炎癥及抗炎治療、氣道重建及防治措

2、施等諸多方面。分子遺傳學的研究已經證實，哮喘是一種復雜的多基因遺傳病，哮喘的發(fā)生、發(fā)展是基因與環(huán)境因素共同導致的復雜過程。遺傳學為宿主對不同環(huán)境因素產生反應提供了很好的基礎，這在復雜疾病研究上起著重要作用，因此理解基因與環(huán)境相互作用的真正分子機制也是研究者所面臨的重要挑戰(zhàn)。 近年來已經有相當多的針對EOS參與哮喘作用機制的研究，如對脂質介質、顆粒蛋白、活性氧自由基的釋放的研究等，但其遷移、粘附、凋亡、出胞、脫顆粒等信號轉導調節(jié)機

3、制尚有待于進一步探討，因此系統(tǒng)的闡述EOS的分子調控機制，也將幫助闡明哮喘的病理生理改變本質并為未來靶向性干預及個性化治療提供理論基礎。因此本研究篩選哮喘患者在發(fā)作期與緩解期外周血EOS差異表達基因，以探索其參與哮喘的分子本質。 目的本研究首先從哮喘治療前后患者外周血獲得高純度的EOS，通過SuperSMARTcDNAsynthesis技術獲得質量及純度較高的cDNA；再采用抑制性消減雜交(SSH)技術，篩選哮喘患者外周血EOS

4、與哮喘發(fā)作有關的差異表達基因，探索EOS參與哮喘的分子機制；進一步研究這些基因功能可能為未來哮喘早期診斷及針對炎性靶細胞治療提供可能的依據(jù)。 結論: 一、哮喘的發(fā)生發(fā)展是一系列細胞與分子事件的結果，是許多與哮喘相關基因表達失常所致。 二、SSH是具有高敏感性、高效率及雜交結果代表性較高的一種基因表達分析方法，結合SuperSMARTcDNAsynthesis技術則可對少量總RNA進行差異表達分析，這也為臨床只可獲

5、得微量樣本的基因表達分析提供新的思路。 三、本研究篩選出眾多與哮喘發(fā)作有關的EOS差異表達基因，這些基因涉及細胞分化、凋亡與存活、細胞內物質運輸、細胞趨化、氧化應激等，可能通過延遲EOS凋亡，促進EOS向肺部聚集，調節(jié)炎性介質釋放，分泌促粘膜下基質沉積蛋白，免疫調控肺微環(huán)境及增加氧自由基釋放等機制，從而參與調節(jié)哮喘氣道炎癥、氣道上皮損傷所致AHR及氣道重建等病理生理過程，其也可能為哮喘易感基因，并可能發(fā)現(xiàn)新的過敏性哮喘氣道炎癥通