輔助抑制分子在誘導(dǎo)口服免疫耐受中的增強效果.pdf

1、背景：B7-H1是輔助免疫調(diào)節(jié)分子B7大家族中的一個，B7家族被熟知為對周圍系統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)起著重要作用。最近，新發(fā)現(xiàn)B7家族的新成員-B7-H4，發(fā)現(xiàn)其對腫瘤細胞特異性T細胞有抑制作用。同時通過口腔投入抗原的研究中發(fā)現(xiàn)：機體再次遭遇此同種抗原時免疫力明顯下降。前者是免疫調(diào)節(jié)中起重要作用的因子,后者在動物實驗和臨床治療中易行且被廣泛應(yīng)用。對于移植排斥反應(yīng)，自身免疫性疾病等需要通過降低機體免疫力來治療的疾病中此類聯(lián)合應(yīng)用治療手段已經(jīng)成為降低免

2、疫治療領(lǐng)域中的熱點。 目的：1)用樹枝狀細胞株-DC2.4誘導(dǎo)對同種抗原的口服免疫耐受；2)檢測B7-H1，B7-H4在誘導(dǎo)口服免疫寬容中的作用；3)檢測有免疫調(diào)節(jié)作用的細胞變化；探討它們在調(diào)節(jié)機體免疫中的作用和關(guān)系。 方法：1)給BALB/C(H-2d)小鼠每天喂食樹枝狀細胞株-DC2.4(H-2b)，誘導(dǎo)對同種抗原的免疫耐受；2)通過靜脈動力進樣(hydrodynamic injection)B7-E1或B7-H4

3、DNA，并利用酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-Linked ImmunosorbnentAssav ELISA)檢測其在血液中分泌的B7-H1或B7-H4蛋白質(zhì)的量；3)通過檢測延遲過敏反應(yīng)(DTH)和單向混合淋巴細胞反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction，MLR)來檢測機體免疫力的變化；4)分離脾細胞，腸系膜淋巴細胞等免疫細胞，進行流式染色，檢測細胞群的變化；5)采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)，比較B7

4、-H1．B7-H4注射組和對照組中分別分離免疫細胞，并擴增免疫細胞中的FoxP3基因，并以核基因組的GAPDH作為定量標(biāo)準(zhǔn)物，比較FoxP3基因的表達差異。 結(jié)果： 1)給BALB/C(H-2d)小鼠每天喂食樹枝狀細胞株--DC2.4(H-2b)，誘導(dǎo)出了對同種異型抗原的免疫耐受(P<0.01)；2)喂食DC2.4同時注射B7-H1或B7-H4 DNA的群體比較對照組延遲過敏反應(yīng)明顯降低(P<0.05)，從注射B7-H1或B7-

5、H4 DNA的群體中分離的免疫細胞做的單向混合淋巴細胞反應(yīng)明顯降低(P<0.05)：3)IFN-γ，IL-5，TNF-α表達水平明顯減低(P<0.05)；4)CD4+CD25+FoxP3+免疫調(diào)節(jié)T細胞在CD4+細胞群中的百分比明顯增高(P<0.05)；5)CD4+細胞中FoxP3基因的表達對比比較組明顯增高(P<0.05)。 結(jié)論：1)給予BALB/C小鼠口腔投入樹枝狀細胞株-DC2.4，可誘導(dǎo)對同種抗原的口服免疫寬容。2)B