輔助抑制分子在誘導(dǎo)口服免疫耐受中的增強(qiáng)效果.pdf

1、背景：B7-H1是輔助免疫調(diào)節(jié)分子B7大家族中的一個(gè)，B7家族被熟知為對(duì)周?chē)到y(tǒng)免疫調(diào)節(jié)起著重要作用。最近，新發(fā)現(xiàn)B7家族的新成員-B7-H4，發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤細(xì)胞特異性T細(xì)胞有抑制作用。同時(shí)通過(guò)口腔投入抗原的研究中發(fā)現(xiàn)：機(jī)體再次遭遇此同種抗原時(shí)免疫力明顯下降。前者是免疫調(diào)節(jié)中起重要作用的因子,后者在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床治療中易行且被廣泛應(yīng)用。對(duì)于移植排斥反應(yīng)，自身免疫性疾病等需要通過(guò)降低機(jī)體免疫力來(lái)治療的疾病中此類(lèi)聯(lián)合應(yīng)用治療手段已經(jīng)成為降低免

2、疫治療領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。 目的：1)用樹(shù)枝狀細(xì)胞株-DC2.4誘導(dǎo)對(duì)同種抗原的口服免疫耐受；2)檢測(cè)B7-H1，B7-H4在誘導(dǎo)口服免疫寬容中的作用；3)檢測(cè)有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞變化；探討它們?cè)谡{(diào)節(jié)機(jī)體免疫中的作用和關(guān)系。 方法：1)給BALB/C(H-2d)小鼠每天喂食樹(shù)枝狀細(xì)胞株-DC2.4(H-2b)，誘導(dǎo)對(duì)同種抗原的免疫耐受；2)通過(guò)靜脈動(dòng)力進(jìn)樣(hydrodynamic injection)B7-E1或B7-H4

3、DNA，并利用酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-Linked ImmunosorbnentAssav ELISA)檢測(cè)其在血液中分泌的B7-H1或B7-H4蛋白質(zhì)的量；3)通過(guò)檢測(cè)延遲過(guò)敏反應(yīng)(DTH)和單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction，MLR)來(lái)檢測(cè)機(jī)體免疫力的變化；4)分離脾細(xì)胞，腸系膜淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞，進(jìn)行流式染色，檢測(cè)細(xì)胞群的變化；5)采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)，比較B7

4、-H1．B7-H4注射組和對(duì)照組中分別分離免疫細(xì)胞，并擴(kuò)增免疫細(xì)胞中的FoxP3基因，并以核基因組的GAPDH作為定量標(biāo)準(zhǔn)物，比較FoxP3基因的表達(dá)差異。 結(jié)果： 1)給BALB/C(H-2d)小鼠每天喂食樹(shù)枝狀細(xì)胞株--DC2.4(H-2b)，誘導(dǎo)出了對(duì)同種異型抗原的免疫耐受(P<0.01)；2)喂食DC2.4同時(shí)注射B7-H1或B7-H4 DNA的群體比較對(duì)照組延遲過(guò)敏反應(yīng)明顯降低(P<0.05)，從注射B7-H1或B7-

5、H4 DNA的群體中分離的免疫細(xì)胞做的單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)明顯降低(P<0.05)：3)IFN-γ，IL-5，TNF-α表達(dá)水平明顯減低(P<0.05)；4)CD4+CD25+FoxP3+免疫調(diào)節(jié)T細(xì)胞在CD4+細(xì)胞群中的百分比明顯增高(P<0.05)；5)CD4+細(xì)胞中FoxP3基因的表達(dá)對(duì)比比較組明顯增高(P<0.05)。 結(jié)論：1)給予BALB/C小鼠口腔投入樹(shù)枝狀細(xì)胞株-DC2.4，可誘導(dǎo)對(duì)同種抗原的口服免疫寬容。2)B