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1、分類號(hào)UDCy9971S6密級(jí)編號(hào)一中南大學(xué)CENTRALSoUTHUNlVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目:嬰痘壹潛迭性腿蛋自二!逡基塞塑活絲匡二墨在縣咽土座細(xì)胞轉(zhuǎn)化蟲笪佳屆丞扭劍學(xué)科、專業(yè):痘堡堂:曼瘟堡生堡堂研究生姓名:韭志住導(dǎo)師姓名及其專業(yè)技術(shù)職稱:塑蟹筮趟中南大學(xué)二DO六年五月亟主芏位i金奎生塞摘要2、LMPl△232051轉(zhuǎn)化的鼻咽上皮細(xì)胞(NP69)生物學(xué)特性分析采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pLNSXLMPlwr與pLNSXLMFI
2、△23”51(以pLNSX空載體為對(duì)照)導(dǎo)入PA317包裝細(xì)胞,600mg/LG418篩選2周后擴(kuò)大培養(yǎng),自細(xì)胞培養(yǎng)上清獲得后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需的感染性逆病毒RVLNSX、RVLMPlwr和RVLMPl△””甜。然后,用濃縮的病毒分別感染鼻咽上皮細(xì)胞NP69,400mg/LG418篩選3周后,匯合克隆培養(yǎng),獲得NP69pLNSX、NP69LMPlwr和NP69一LMPl△23”513種轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。分別觀察和檢測(cè)這些轉(zhuǎn)化細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)曲線、平板
3、克隆、軟瓊脂生長(zhǎng)能力和抗凋亡能力。結(jié)果顯示:(1)NP69LMPl△232。3”細(xì)胞的形態(tài)與NP69LMPlwT細(xì)胞的一樣,在培養(yǎng)過程中,逐漸由扁平、鵝卵石樣典型上皮形態(tài)逐漸演變成細(xì)胞間接觸減少的長(zhǎng)梭狀纖維細(xì)胞樣形態(tài);(2)與NP69LMPlwl。細(xì)胞相比,NP69LMPl△232琊1細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖能力降低,在軟瓊脂實(shí)驗(yàn)中形成的集落較野生型減少(25614VS887,P005),且集落較小。(3)NP69LMPI△23”51細(xì)胞抗凋亡
4、能力明顯低于NP69LMPlwr細(xì)胞(NP69LMPl△232。51細(xì)胞較NP69一LMPlwT細(xì)胞的凋亡率為4534_272VS1413198,PO05)。以上結(jié)果提示CTAR3參與了LMPl促細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化和抑制凋亡等信號(hào)過程,是LMPl羧基末端重要的轉(zhuǎn)化效應(yīng)位點(diǎn)之一。3、LMPl△23”卯轉(zhuǎn)化的鼻咽上皮細(xì)胞(NP69)蛋白質(zhì)組學(xué)研究采用雙向凝膠電泳技術(shù)(2DE)分離NP69pLNSX、NP69LMPlww和NP69LMPl△232
5、琊1三株細(xì)胞的總蛋白,建立了重復(fù)性和分辨率均較好的NP69pLNSX、NP69LMPlwr和NP69LMPl△232。3”細(xì)胞系的雙向凝膠電泳圖譜,總蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)分別為1099士38、1088士43和1142t:46,平均匹配率為925%。與NP69一pLNSX細(xì)胞相比,右ENP69一LMPlwl細(xì)胞中,有27蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)上調(diào),24個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)下調(diào);與NP69一LMPlwl細(xì)胞相比,NP69LMPl△23“51在細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)
6、26個(gè),下調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)33個(gè)。應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI。TOFMS)檢測(cè),共鑒定了39個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)。在這些蛋白質(zhì)中,NP69LMPlw。與NP69pLNSX細(xì)胞之間所鑒定的蛋白有參與代謝相關(guān)的酶類蛋白檸檬酸合酶;參與信號(hào)傳導(dǎo)通路的膜聯(lián)蛋白A2以及參與轉(zhuǎn)錄和翻譯的相關(guān)蛋白延長(zhǎng)因子1等,更多的是與細(xì)胞惡性程度相關(guān)及促細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的一些結(jié)構(gòu)蛋白,如波形蛋白、核纖層蛋白~fC、細(xì)胞角蛋白19等。另外,NP69LM
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