IGF-I凝膠對自體移植帶軟骨膜肋軟骨增殖及代謝的作用.pdf

1、耳廓再造術(shù)中,肋軟骨以其取材方便,便于雕刻成型而被廣泛采用。自體軟骨移植雖無排斥反應(yīng),但仍存在再造耳廓變形、攣縮,與正常耳廓外觀不對稱等不良手術(shù)后果。胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)是調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞合成的重要生長因子之一,國內(nèi)外學(xué)者離體實(shí)驗(yàn)證實(shí)它能刺激細(xì)胞的分裂增殖,增強(qiáng)細(xì)胞蛋白多糖及Ⅱ型膠原的合成。但針對IGF-Ⅰ對體內(nèi)自體移植的肋軟骨起何種作用,尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道。
　　研究目的：評(píng)估IGF-Ⅰ凝膠對自體移植帶軟骨膜肋軟骨增殖及

2、代謝的作用。
　　材料和方法：
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:健康新西蘭白兔24只,幼年及成年各12只,雌雄不限,幼年兔為1月齡,體重1kg左右,成年兔為6月齡,體重2.5kg左右。按年齡分為幼年組及成年組,各組中再隨機(jī)分為手術(shù)對照組、10ng/ml實(shí)驗(yàn)組及50ng/ml實(shí)驗(yàn)組,每組各4只。手術(shù)對照組直接將自體肋軟骨取出,移植于背部皮下;10ng/ml實(shí)驗(yàn)組將自體肋軟骨取出后,與0.5ml的10ng/mlIGF-Ⅰ凝膠混合為軟骨-生長

3、因子復(fù)合物后移植于背部皮下;50ng/ml實(shí)驗(yàn)組將自體肋軟骨取出后,與0.5ml的50ng/mlIGF-Ⅰ凝膠混合為軟骨.生長因子復(fù)合物后移植于背部皮下。在手術(shù)后8周,再取術(shù)側(cè)對側(cè)生理情況下生長的肋軟骨作為空白對照組共同進(jìn)行檢測。
　　凝膠制備及手術(shù)方法:纖維蛋白原(200mg/ml)、凝血酶(10u/ml)、IGF-I(10、50ng/ml)混合制備成IGF-Ⅰ纖維蛋白凝膠,現(xiàn)用現(xiàn)配。實(shí)驗(yàn)兔麻醉、消毒后取出第8、9肋軟骨,截為3

4、段,按不同組別直接移植于背部皮下或混合不同濃度凝膠后移植于背部皮下。
　　標(biāo)本采集及結(jié)果評(píng)估:移植8周后,動(dòng)物處死,取出移植的肋軟骨,與空白對照組共同進(jìn)行檢測。檢測項(xiàng)目包括:大體觀察、HE染色、透射電鏡檢查及軟骨羥脯氨酸分析。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:使用stata7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理。對于各組所得到的軟骨羥脯氨酸含量的結(jié)果,運(yùn)用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析評(píng)價(jià)其4組間有無差異,各組間差異的評(píng)價(jià)通過t檢驗(yàn)來實(shí)現(xiàn)。
　

5、　結(jié)果：
　　1.大體觀察:術(shù)后8周,幼年兔中,50ng/ml實(shí)驗(yàn)組移植軟骨與周圍組織粘連較牢固,不易分離;手術(shù)對照組與10ng/ml實(shí)驗(yàn)組移植軟骨與周圍組織無明顯粘連,較易分離。手術(shù)對照組與50ng/ml實(shí)驗(yàn)組移植軟骨呈乳白色,半透明,略有彈性,與空白對照組軟骨相近;10ng/ml實(shí)驗(yàn)組移植軟骨色澤偏黃,透明感及彈性均較差。成年兔中,各組差別不明顯,但軟骨彈性均較幼年軟骨差。
　　2.HE染色:幼年兔中,50ng/ml實(shí)驗(yàn)

6、組軟骨膜完整,骨原細(xì)胞較多,軟骨細(xì)胞增生活躍;手術(shù)對照組及10ng/ml實(shí)驗(yàn)組軟骨膜結(jié)構(gòu)紊亂,細(xì)胞結(jié)構(gòu)少,軟骨細(xì)胞發(fā)生退行性變。成年兔中,50ng/ml實(shí)驗(yàn)組軟骨膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)較其余各組多,但4組軟骨均存在空泡形成及基質(zhì)分離現(xiàn)象。
　　3.透射電鏡檢查:幼年兔軟骨透射電鏡表現(xiàn):在空白對照組及50ng/ml實(shí)驗(yàn)組中,可見健康的軟骨細(xì)胞,軟骨與周圍組織交界處成纖維細(xì)胞少;手術(shù)對照組中,可見到壞死的軟骨細(xì)胞,與周圍組織交界處成纖維細(xì)胞活躍;

7、10ng/ml實(shí)驗(yàn)組中,可見到散在的鈣化灶,未發(fā)現(xiàn)正常的軟骨細(xì)胞。成年兔軟骨透射電鏡表現(xiàn):空白對照組中,可見軟骨與周圍組織交界處有成熟的成纖維細(xì)胞;手術(shù)對照組中,可見軟骨與周圍組織交界處有壞死的軟骨細(xì)胞;10ng/ml實(shí)驗(yàn)組中,也可見到軟骨細(xì)胞壞死,但軟骨膜細(xì)胞正常;50ng/ml實(shí)驗(yàn)組中,可見健康的軟骨細(xì)胞,同時(shí)軟骨基質(zhì)增多明顯。
　　4.軟骨羥脯氨酸分析:幼年兔:空白對照組與50ng/ml實(shí)驗(yàn)組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05

8、),且均大于手術(shù)對照組和10ng/ml實(shí)驗(yàn)組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),手術(shù)對照組與10ng/ml實(shí)驗(yàn)組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。成年兔:各組問差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.在幼年兔中,50ng/ml濃度的IGF-Ⅰ凝膠可以保持其正常生理狀況下的增殖,和軟骨細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)的能力,維持移植后的軟骨及軟骨膜細(xì)胞的正常表型。
　　2.10ng/ml濃度的IGF-Ⅰ凝膠對幼年兔