抗胃癌MGr1單鏈抗體和MGb2單域抗體的制備及活性檢測(cè).pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文抗胃癌MGr1單鏈抗體和MGb2單域抗體的制備及活性檢測(cè)姓名：安華章申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)(消化系病)指導(dǎo)教師：樊代明2000.6.1笫心車陵大學(xué)糟j一論文二吏守破下面i’交蘭《豇爵，。實(shí)驗(yàn)一，MGr。單鏈抗體的制備及其生物學(xué)活性的初步研究(摘要)＼|f博士研究生安華章，7＼導(dǎo)師樊代明j將抗體用于腫瘤的診治是醫(yī)學(xué)研究的重要課題之一?？葱匀贵w分子用于人體的主要障礙是容易引起人抗小鼠抗體反應(yīng)和過(guò)敏反應(yīng)，而

2、人抗體的制備仍存在一些難以克服的困難。因此，有必要對(duì)鼠源性抗體進(jìn)行改進(jìn)以利于鼠源性抗體在人體內(nèi)的應(yīng)用。與親本抗體相比，利用基因工程技術(shù)制備的單鏈抗體具有免疫原性弱、組織穿透性強(qiáng)、易于大量制備、遺傳背景穩(wěn)定并容易進(jìn)行改造等優(yōu)點(diǎn)，更適于在體內(nèi)的應(yīng)用。胃癌是我國(guó)發(fā)病率最高的惡性腫瘤。由于多藥耐藥性的產(chǎn)生，胃癌對(duì)化療的敏感性較低，目前臨床上尚無(wú)有效的解決方法。MGr。單克隆抗體可識(shí)別胃癌細(xì)胞耐藥相關(guān)抗原，在體外實(shí)驗(yàn)中能部分逆轉(zhuǎn)胃癌耐藥細(xì)胞多藥耐

3、藥性≯為了獲得MGr單抗的遺傳背景，促進(jìn)其在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及臨床上的應(yīng)用，我們克隆了MGrmAb的可變區(qū)基因，并制備了MGr單鏈抗體scFvGr，f(1)利用RTPCR方法以MGrl雜交瘤細(xì)胞總RNA為模板擴(kuò)增MGr。＼mAb重鏈和輕鏈可變區(qū)基因(Gr。V。，Gr。V。)，雙脫氧鏈末端終止法對(duì)GrV。和Gr。VL進(jìn)行測(cè)序，利用計(jì)算機(jī)軟件推導(dǎo)Gr，V。和Gr，V。編碼的氨基酸序列并進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明，GrvH、Grv。均為新的抗體可變區(qū)基