我國三種養(yǎng)殖河鲀揮發(fā)性風味及活體檢測魚體中河鲀毒素研究.pdf

1、河鲀魚(Fugu)又名氣泡魚，以其味道鮮美而深受消費者的青睞，與鰣魚、刀鱭并稱為“長江三鮮”。而其體內(nèi)的河鲀毒素是一種毒性很強、相對分子質(zhì)量最小的非蛋白毒素，讓人垂涎三尺卻望而生畏。近年來，隨著我國河鲀養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，建立一種快速有效對河鲀毒素(Teterodotoxin, TTX)的檢測方法是保障河鲀魚安全食用的技術支撐。本文對構成河鲀鮮美的揮發(fā)性風味物質(zhì)進行了分析研究，隨后第一次用活體檢測的方法來檢測河鲀毒素，為研究TTX在河鲀

2、體內(nèi)的產(chǎn)生與富集提供了新的思路。對揭開河鲀魚美味的奧秘、河鲀魚加工利用都具有重要的意義，也為研究TTX在河鲀體內(nèi)的產(chǎn)生與富集提供了新的思路。
　　本文以三種養(yǎng)殖東方鲀：暗紋東方鲀（Takifugu obscures）、菊黃東方鲀（Takifugu flavidus）和紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）為研究對象，通過比較微波輔助萃取耦合溶劑輔助風味蒸發(fā)法（MAE-SAFE）和加速溶劑萃取耦合溶劑輔助風味蒸發(fā)法（ASE

3、-SAFE）對養(yǎng)殖東方鲀揮發(fā)性成分的提取效果，結合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）和全二維氣相色譜/飛行時間質(zhì)譜(GC質(zhì)譜相色譜性成分的提取對揮發(fā)性成分進行定性和內(nèi)標定量分析對揮發(fā)性成分進行鑒定分析。從而建立一種快速、準確、簡單的揮發(fā)性成分提取方法，為養(yǎng)殖東方鲀的揮發(fā)性成分研究奠定基礎，旨在為探究河鲀魚美味奧秘及改善河鲀魚肉品質(zhì)等方面提供有參考意義的基礎理論數(shù)據(jù)。之后又建立了在活體暗紋東方鲀中快速檢測河鲀毒素的方法，本文使用自制的固相微

4、萃?。⊿olid-phase Miroextraction, SPME）探針萃取河鲀活體中的河鲀毒素并結合LC-MS/MS，以期建立一種能夠跟蹤TTX在河鲀體內(nèi)富集變化的樣品前處理方法。本研究的主要內(nèi)容和結果如下：
　?。?）比較 MAE-SAFE和加速溶劑萃取耦合溶劑輔助風味蒸發(fā)法（ASE-SAFE）對菊黃東方鲀的揮發(fā)性物質(zhì)的提取效果，從而選取效果較好的方法應用于三種熟制東方鲀的揮發(fā)性風味物質(zhì)的檢測與比較。MAE-SAFE法結合

5、GC-MS檢測到42種物質(zhì)，其中7種化合物為水產(chǎn)品中的特征性氣味物質(zhì)。ASE-SAFE法結合GC-MS共檢測到33種物質(zhì)，其中水產(chǎn)品中的特征性氣味物質(zhì)僅為2種。故選用MAE-SAFE法（二氯甲烷為萃取劑）結合氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)與全二維氣相色譜/飛行時間質(zhì)譜(GC質(zhì)譜譜譜取劑）結合氣分析手段，對暗紋、菊黃和紅鰭3種河鲀魚肉中揮發(fā)性物質(zhì)的組成和相對含量進行定性、定量分析。試驗結果表明：從3種河鲀魚肉中共檢測出215種揮發(fā)性物質(zhì)，較之

6、前的研究多了一倍，暗紋東方鲀110種、菊黃東方鲀108種和紅鰭東方鲀89種。其中，菊黃東方鲀獨有的揮發(fā)性物質(zhì)有30種，暗紋東方鲀25種，紅鰭東方鲀13種。
　?。?）為了研究河鲀熟制前后揮發(fā)性風味物質(zhì)的效果，常溫溶劑萃取法結合 GC－MS分析鑒定表明:生河鲀和熟制河鲀中分別鑒定出42種和61種揮發(fā)性物質(zhì)，主要有醇、醛、酮、烴、酯、酸、芳香族、含氮化合物、酚類等物質(zhì)，其中只有13種物質(zhì)在兩種樣品中均有檢出，熟制后河鲀魚的揮發(fā)性風味物

7、質(zhì)種類和含量發(fā)生了明顯的變化;生河鲀中醛類含量最高，其中苯甲醛和1-辛烯-3-醇含量分別高達68.15％和9.22%;熟制河鲀中醇類和酸類含量較高，其中2,3-丁二醇和(2R，3R)-(-)-2,3-丁二醇含量高達22.80%和19.84%。
　?。?）本建立了基于活體固相微萃取與高效液相串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的快速檢測方法。篩選出最優(yōu)實驗條件：萃取時間45min，萃取溫度30℃，轉速500rmp，甲醇45min，在加標水樣中對比了自制探針

8、 PS@PDA-GA與商用 PDMS和 PA萃取效果，PS@PDA-GA分別比商用PDMS和PA萃取頭的萃取效果高出120倍和20倍。使用自制探針萃取加標魚肉，結果重現(xiàn)性好（單針和多針重現(xiàn)性分別為12.1%和7.9%）、線性范圍款（1-1000 ng·g-1, R2=0.9951）、靈敏度（LOD=12.3 ng·g-1）。結果令人滿意，可用于接下來的活體實驗，尤其是本實驗建立的方法的LOD值比中華人民共和國標準法(GB/T23217-