PRKDC、XRCC4多態(tài)性與中國(guó)安陽(yáng)地區(qū)食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、背景：
　　食管癌是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在全球范圍內(nèi)，食管癌導(dǎo)致的死亡率高居第六位。全球數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果提示，食管癌的分布具有明顯的地區(qū)、地域、民族差異，在我國(guó)、南非、沙特阿拉伯等國(guó)發(fā)病率較高，高、低發(fā)區(qū)發(fā)病率相差高達(dá)500倍。在中國(guó)北方，河南省、山東省、河北省交界處發(fā)病率明顯高于其他地方，尤其是河南安陽(yáng)地區(qū)，每十萬(wàn)人大約有32.22人次因?yàn)槭彻馨┧劳?，比食管癌低發(fā)區(qū)的云南發(fā)病率高30倍之多。
　　食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)

2、雜，是一個(gè)發(fā)生多環(huán)境因素參與、多基因變異及多階段逐步發(fā)生的過(guò)程。飲酒，吸煙，營(yíng)養(yǎng)攝入不足，機(jī)體所處的環(huán)境和遺傳信息差別均與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率有關(guān)。其中遺傳信息的差別及食管鱗癌發(fā)病率之間的關(guān)系是研究的熱點(diǎn)之一。
　　在某種環(huán)境下長(zhǎng)期生存的個(gè)體，由于環(huán)境的長(zhǎng)期選擇作用，機(jī)體針對(duì)特定的環(huán)境特性形成相應(yīng)的基因點(diǎn)突變，此為個(gè)體遺傳物質(zhì)差異的重要表現(xiàn)，體現(xiàn)出單堿基突變水平的基本遺傳物質(zhì)的遺傳變異，此即單核苷酸多態(tài)性(SNP)。發(fā)生SNP的

3、類型和頻率具有明顯的種族，地域的差異，因此，常見(jiàn)于某地區(qū)或民族的SNP等位基因在其他地區(qū)或民族可能很少見(jiàn)，這些遺傳變異解釋了為何人體對(duì)疾病易感性、疾病的嚴(yán)重程度及治療效果存在差異。近年來(lái)，復(fù)雜性疾病的功能性SNP及對(duì)藥物、毒物反應(yīng)相關(guān)SNP的研究已經(jīng)取得進(jìn)展，SNP在功能性疾病發(fā)生發(fā)展中的作用也逐漸被揭示。
　　DNA雙鏈斷裂(DSB)是一種嚴(yán)重的DNA損傷形式，包括編碼基因的丟失，染色體缺失、重排、重組等變化均會(huì)對(duì)細(xì)胞造成嚴(yán)重后

4、果，隨后將導(dǎo)致細(xì)胞功能失常，從而引起細(xì)胞死亡或腫瘤的發(fā)生。而DSB損傷的修復(fù)主要是通過(guò)非同源末端連接修復(fù)(nonhomologous end joining，NHEJ)及同源重組修復(fù)(homologous recombination，HR)兩條途徑完成的。本研究所涉及的兩個(gè)基因PRKDC、XRCC4就是NHEJ通路的重要組成部分，其基因多態(tài)性可能與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。
　　目的：
　　本研究針對(duì)環(huán)境與遺傳背景相對(duì)一致的食

5、管鱗癌患者以及與之相匹配的健康人群，采用候選基因的方法，應(yīng)用目前準(zhǔn)確、高通量的DNA測(cè)序技術(shù)及PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)PRKDC及XRCC4基因多態(tài)性，探討他們與食管鱗癌發(fā)病相關(guān)聯(lián)的遺傳易感因素，為人群中高危個(gè)體的篩選、實(shí)施有針對(duì)性的干預(yù)、預(yù)防等措施，降低食管鱗癌的發(fā)生提供重要的理論依據(jù)。
　　方法：
　　本研究采用病例-對(duì)照的研究方法，收集在河南省安陽(yáng)腫瘤醫(yī)院住院的食管鱗癌患者共189例，平均年齡60.23±7.91歲，所

6、有病例均經(jīng)胃鏡檢查病理活檢或手術(shù)切除后病理組織學(xué)檢查確診為食管鱗狀細(xì)胞癌;所有標(biāo)本采集于術(shù)前并且未經(jīng)放療或化療。對(duì)照為189例健康對(duì)照者，平均年齡59.40±7.86歲，均為長(zhǎng)期居住在河南安陽(yáng)地區(qū)的漢族人群、體檢健康、無(wú)自身免疫性疾病及腫瘤史。所有研究對(duì)象均同意和自愿參加該項(xiàng)研究。
　　患者入組后由專人詢問(wèn)收集病例組及對(duì)照組每個(gè)研究對(duì)象詳細(xì)的人口學(xué)資料、吸煙史、飲酒史及家族史的情況。所有研究對(duì)象均于入組次日晨空腹抽取靜脈血5ml保

7、存于抗凝試管內(nèi)，置于-20℃冰箱保存待測(cè)提取DNA，最后統(tǒng)一嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)程序提取外周血DNA。查詢NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp）得到NHEJ修復(fù)通路中PRKDC、XRCC4基因完整的基因組序列，根據(jù)文獻(xiàn)并利用Haploview軟件選擇PRKDC基因的rs7003908位點(diǎn)及XRCC4基因的rs1805377位點(diǎn)進(jìn)行研究，所選的SNPs最小等位基因頻率大于10％。采用RFLP法及DNA直接測(cè)序法

8、對(duì)所有研究對(duì)象的各個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測(cè)。
　　進(jìn)行酶切反應(yīng)后，從酶切結(jié)果確定的各基因型中選擇10個(gè)樣本的PCR擴(kuò)增原液樣品采用DNA測(cè)序的方法明確目標(biāo)基因片段的堿基順序，兩種檢測(cè)結(jié)果相互印證，以證明RFLP結(jié)果的可靠性。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差、頻數(shù)、頻率和百分比表示。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件STATA.11以卡方檢驗(yàn)驗(yàn)證基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。如符合則納入統(tǒng)計(jì)分析，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0，使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)

9、，對(duì)病例組和對(duì)照組的年齡進(jìn)行方差齊性分析。對(duì)性別、年齡1:1配對(duì)的病例組和對(duì)照組利用單因素條件logistic回歸分析法比較吸煙史、飲酒史、食管癌家族史及rs1805377(XRCC4)、rs7003908（PRKDC）基因多態(tài)位點(diǎn)的分布差異。如有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，則納入條件多變量Logistic回歸法分析，回歸法分析計(jì)算的得數(shù)稱為比值比(OR)，一般臨床采取其95％可信區(qū)間(CI)，在此區(qū)間的數(shù)值越大，表示根據(jù)SNP計(jì)算出的人口學(xué)因素及

10、基因型與食管鱗癌風(fēng)險(xiǎn)之間的相關(guān)性越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)所進(jìn)行的相關(guān)的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均進(jìn)行雙側(cè)概率檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表明有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1、通過(guò)單因素條件logistic回歸分析結(jié)果可見(jiàn):食管鱗癌組吸煙個(gè)體87例，占46.0％，而對(duì)照組僅72例，食管鱗癌組高于對(duì)照組(38.1％)(P＜0.05），經(jīng)過(guò)年齡、性別校正，結(jié)果顯示OR=1.882，95％ CI=1.045～3.390，有明顯

11、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　2、食管鱗癌組飲酒個(gè)體54例(28.6％)，明顯高于對(duì)照組39例(20.6％)(P＜0.05)，統(tǒng)計(jì)顯示經(jīng)過(guò)年齡、性別校正OR值為1.75，95％ CI介于1.010～3.031之間;
　　3、食管鱗癌組有食管癌家族史個(gè)體68例(36.0％)，明顯高于對(duì)照組41例(21.7％)(P＜0.05），經(jīng)年齡、性別校正OR=1.929，95％ CI=1.222～3.044，表明食管癌家族史在病例組及對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)

12、學(xué)意義。
　　4、在XRCC4基因rs1805377、PRKDC基因rs7003908這兩個(gè)位點(diǎn)均發(fā)現(xiàn)基因多態(tài)性。其基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)。
　　5、XRCC4基因rs1805377多態(tài)位點(diǎn)處AA基因型為野生型，AG和GG為突變型，與A/A基因型相比，A/G基因型和攜帶G等位基因的基因型(A/G+G/G)均不改變食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)吸煙、飲酒、家族史等混雜因素校正后的OR值

13、分別為0.933(95％CI=0.620～1.406)、0.818(95％CI=0.392～1.707)和0.878(95％CI=0.585～1.319)，結(jié)果顯示各基因型頻率分布在兩組間無(wú)顯著性差異。
　　6、rs7003908(PRKDC)多態(tài)位點(diǎn)AA基因型為野生型，AC和CC為突變型，病例組中CC基因型頻率顯著高于對(duì)照組(P=0.013)，經(jīng)吸煙、飲酒和家族史等混雜因素校正的OR=3.637，95％CI=1.313-10.0

14、72。且吸煙、飲酒與基因多態(tài)性位點(diǎn)之間及各基因多態(tài)性位點(diǎn)之間不存在交互作用(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、吸煙、飲酒、食管癌家族史分別作為獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可以顯著增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　2、在XRCC4基因rs1805377位點(diǎn)及PRKDC基因rs7003908位點(diǎn)均發(fā)現(xiàn)單核苷酸多態(tài)性。
　　3、XRCC4基因rs1805377位點(diǎn)及PRKDC基因rs7003908位點(diǎn)基因型頻率分布均符合Hardy-