丙型肝炎病毒核心蛋白對(duì)人源性肝細(xì)胞凋亡及自噬的影響.pdf

1、目的:
　　構(gòu)建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白真核表達(dá)載體pIRES-core，轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的人源性肝細(xì)胞QSG7701，研究丙型肝炎病毒核心蛋白對(duì)QSG7701細(xì)胞凋亡及自噬的影響。初步探討丙型肝炎病毒核心蛋白在丙型肝炎和肝細(xì)胞癌中的致病機(jī)制。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人源性肝細(xì)胞QSG7701，將細(xì)胞分為QSG7701組（未轉(zhuǎn)染組）、QSG7701/pcDNA3.1組（轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組）及QSG7701/core組（

2、轉(zhuǎn)染pIRES/core組）。然后通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將HCV核心蛋白真核表達(dá)載體pIRES-core轉(zhuǎn)染至QSG7701細(xì)胞中。AnnexinV-FITC/PI雙染倒置熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;Western blotting印記法檢測(cè)HCV核心蛋白及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá);采用小分子干擾RNA(siRNA)技術(shù)抑制肝細(xì)胞NF-κB表達(dá)，流式細(xì)胞儀再次檢測(cè)三組細(xì)胞凋亡率。Western blotti

3、ng印記法檢測(cè)自噬體標(biāo)記分子LC3及自噬相關(guān)基因Beclin-1的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　Annexin V-FITC/PI雙染法倒置熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核變化，可見(jiàn)PI將凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核染成紅色，細(xì)胞核大小不等，出現(xiàn)核固縮、核碎裂、核溶解等細(xì)胞凋亡的特異性表現(xiàn);流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示QSG7701/core組細(xì)胞凋亡率為（1.34±0.07）％，低于QSG7701組（未轉(zhuǎn)染組）（2.35±0.11）％和QSG7701

4、/pcDNA3.1組（轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組）（2.58±0.13）％，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;Western blotting印記法檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在QSG7701/core組表達(dá)上調(diào);將QSG7701細(xì)胞分為正常對(duì)照組（不作處理）、陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染陰性siRNA組）及siRNA組（轉(zhuǎn)染NF-κB siRNA組），小分子干擾RNA(siRNA)技術(shù)抑制肝細(xì)胞NF-κB表達(dá)，流式細(xì)胞儀再次觀察凋亡率，siRNA組凋亡率為（

5、2.38±0.17）％，高于正常對(duì)照組(1.20±0.11)％和陰性對(duì)照組（1.29±0.09）％，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western blotting法檢測(cè)自噬泡標(biāo)記分子LC3及自噬相關(guān)基因Beclin-1在QSG7701/core組表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論:
　　HCV核心蛋白能夠抑制人源性肝細(xì)胞QSG7701的細(xì)胞凋亡，其主要機(jī)制可能是轉(zhuǎn)錄因子NF-κB表達(dá)上調(diào)。HCV核心蛋白可提高QSG7701的細(xì)