Ang-Tie2信號鏈在高糖誘導的腹膜血管新生中的作用研究.pdf

1、高濃度葡萄糖（高糖）是腹膜透析（腹透）液最重要的非生物相容性因素。研究表明高糖透析液的使用與腹透患者腹膜血管新生有著密切的關系，但高糖引起腹膜血管新生的機制尚不明了。血管生成素/酪氨酸激酶受體2（Angiopoietin/ tyrosine kinase receptor 2，Ang/Tie2）信號是調(diào)控血管新生的主要通路之一，然而其在腹膜組織血管新生中的作用卻鮮為人知。本文以人臍靜脈內(nèi)皮細胞（Human umbilical vascu

2、lar endothelial cells，HUVECs）為研究對象，觀察高糖對HUVECs 血管新生能力的影響，研究高糖對HUVECsAng/Tie2信號表達的影響，并進一步研究阻斷Ang/Tie2對HUVECs血管新生能力的影響，以探討Ang/Tie2信號在高糖誘導的腹膜血管新生中的作用。
　　 本研究將HUVECs分為以下三組:正常對照組、高糖（1.5％葡萄糖）組和高滲（1.5％甘露醇）組。采用MTT法觀察細胞增殖，流式細

3、胞術分析細胞周期，細胞遷移實驗和管狀結構形成能力來觀察HUVECs的血管新生能力；采用Real-time PCR、Western blot、ELISA檢測Ang/Tie2信號的表達變化；采用可溶性Tie2融合蛋白（sTie2-Fc）阻斷Ang/Tie2以探討對HUVECs的血管新生能力的影響。
　　 本文的第一部分研究結果顯示，與正常對照組相比，1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h、12h均能顯著刺激內(nèi)皮細胞的增

4、殖（P 均<0.05）。
　　 1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h，均能顯著增加HUVECs進入S期的細胞數(shù)目（P 均<0.05），延長刺激時間至12h不能延長這一作用。與對照組相比，細胞遷移功能和管狀結構形成能力檢測顯示，1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 12h后遷移細胞的數(shù)量顯著增加（1.5％ 葡萄糖 vs 對照組, 236±17.1 vs169.2±7.7, p<0.05 ； 1.5％甘露醇

5、vs對照組 ,238.6±15.5vs169.2±7.7 ，p<0.05），管狀結構形成明顯增多（1.5％葡萄糖vs對照組, 17.4±1.82vs9.8±1.30 ，p<0.05 ；1.5％甘露醇vs對照組,14.4±1.67vs9.8±1.30，p<0.05），并且1.5％葡萄糖引起的HUVECs管狀結構形成數(shù)目多于1.5％甘露醇（1.5％ 葡萄糖vs1.5％甘露醇, 17.4±1.82vs14.4±1.67, p<0.05）。

6、r>　　 第二部分研究中，我們觀察到刺激HUVECs 6h，1.5％葡萄糖能顯著上調(diào)Ang2 mRNA的表達（P<0.05），而1.5％甘露醇對Ang2 mRNA的表達沒有明顯影響。延長刺激時間至12h，1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激的HUVECs 的Ang2 mRNA的表達較正常對照組顯著降低（P<0.05）。 1.5％葡萄糖刺激HUVECs 6h和12h均明顯增加Ang2分泌量（6h1.5％葡萄糖vs對照組,6066±837v

7、s4648±676pg/ml，p<0.05；12h 1.5％葡萄糖vs對照組,11321±1141vs7255±317 pg/ml，p<0.05）；1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h Ang2分泌量沒有明顯增加（6h 1.5％ 甘露醇 vs 對照組, 5160±1322 vs 4648±676pg/ml，p>0.05），刺激12h Ang2 的分泌量明顯增加（12h 1.5％甘露醇vs 對照組, 10560±529vs 7255±31

8、7pg/ml，p<0.05）。1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h后，Tie2mRNA的表達均明顯升高（P 均<0.05），延長刺激時間至12h Tie2 mRNA表達較正常對照組沒有差異。1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h和12h，Tie2蛋白的表達與正常對照組相比無明顯差異。
　　 在本研究的第三部分中，我們觀察了阻斷Ang/Tie2通路對HUVECs血管新生能力的影響。研究結果顯示，sTi

9、e2-Fc能明顯抑制1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇誘導的內(nèi)皮細胞遷移數(shù)目（1.5％葡萄糖+ sTie2-Fc vs 1.5％葡萄糖,191.8±8.93vs 236±15.30,p<0.05；1.5％甘露醇+sTie2-Fc vs 1.5％甘露醇,205.8±16.63vs 238.6±13.85，p<0.05；），但仍多于正常對照組（1.5％葡萄糖+sTie2-Fc vs對照組, 191.8±8.93 vs 169.2±6.88, p

10、<0.05；1.5％甘露醇+ sTie2-Fcvs對照組, 205.8±16.63 vs 169.2±6.88, p<0.05）。阻斷Ang/Tie2能顯著減少1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇誘導的HUVECs管狀結構形成（1.5％葡萄糖+sTie2-Fc vs對照組, 6.4±1.14vs9.8±1.30 ,p<0.05；1.5％甘露醇+ sTie2-Fc vs對照組, 6.2±1.10vs9.8±1.30 ,p<0.05；）。

11、　　 綜上，高濃度葡萄糖可能通過促進內(nèi)皮細胞增殖、遷移和血管形成能力在長期腹透中起促血管新生作用，而這一作用主要與其本身產(chǎn)生的高滲透壓有關，并且高濃度葡萄糖還可能具有獨立于其高滲透壓之外的促血管新生作用。高濃度葡萄糖能夠影響內(nèi)皮細胞Ang2 的表達并且葡萄糖本身具有獨立于高滲透壓的上調(diào)Ang2的作用。Ang2/Tie2通路可能參與了高濃度葡萄糖誘導的腹膜血管新生過程。阻斷Ang2/Tie2可明顯抑制高濃度葡萄糖誘導的血管新生過程，提示