2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究GTP酶激活蛋白-Src同源結構域3-結合蛋白1[GTPase activatingprotein-(Src homology domain3)-binding protein1,G3BP1]是否參與了人乳腺癌細胞系MDA-MB-231及人非小細胞肺癌細胞系A549的體外遷移過程,并在結果為陽性的前提下嘗試提出可能的理論機制。
   方法:
   一:免疫印跡法檢測MDA-MB-231中G3BP1表達水平是否與

2、文獻報道一致;向MDA-MB-231細胞內轉染以G3BP1的mRNA為靶點的小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)以抑制G3BP1的表達;趨化實驗檢測抑制G3BP1表達后MDA-MB-231細胞穿過10μm聚碳酸酯膜的數量;10ng/ml表皮生長因子(epidermal growth factor, EGF)分別刺激30s、1min、2min以及5min時MDA-MB-231細胞內G3BP1,PKCζ,A

3、kt,pPKCζThr410/403和pAktser473的表達情況。免疫共沉淀法檢測MDA-MB-231內G3BP1是否與PKCζ存在相互作用。
   二:以MDA-MB-231為陽性對照,免疫印跡法檢測A549內G3BP1的表達情況;A549細胞內轉染以G3BP1的mRNA為靶點的siRNA以抑制G3BP1的表達;趨化實驗、體外侵襲實驗及劃痕實驗分別檢測A549細胞穿過8μm聚碳酸酯膜、人工基底膜(matrigel)的數量,

4、以及在無外源趨化誘導物刺激情況下定向運動距離。最后,免疫印跡法檢測G3BP1在另外3種肺癌細胞系GLC-82、H1299以及NCI-H358中的表達情況。
   結果:
   一:經免疫印跡法檢測,G3BP1在乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞中表達異常升高,與文獻報道一致;轉染siRNA后經免疫印跡法檢測MDA-MB-231細胞內的G3BP1表達被完全抑制;趨化實驗、劃痕實驗分別顯示在內源性G3BP1表達被抑制的情況下

5、,MDA-MB-231細胞在體外穿過8μm聚碳酸酯膜的數量、無外源趨化誘導物刺激情況下定向運動距離均比G3BP1未被抑制的MDA-MB-231細胞顯著下降(P<0.05);10ng/mlEGF分別刺激30s、1min、2 min以及5min,MDA-MB-231細胞內G3BP1,蛋白激酶Cζ(protein kinase Cζ,PKCζ)與蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)表達水平幾乎無變化,pPKCζThr410/

6、403、pAktser473及pAkt表達水平隨外源EGF刺激時間延長而逐漸增加,至5min時達到峰值。MDA-MB-231細胞內G3BP1與PKCζ存在相互作用。
   二:經免疫印跡法檢測,G3BP1在A549中的表達水平與其在MDA-MB-231中非常接近,故可以推測其在A549中表達同樣異常升高;轉染siRNA后經免疫印跡法檢測A549細胞內的G3BP1表達被完全抑制;趨化實驗、體外侵襲實驗以及劃痕實驗分別顯示在內源性G

7、3BP1表達被抑制的情況下,A549細胞穿過8μm聚碳酸酯膜、人工基底膜的數量、無外源趨化誘導物刺激情況下定向運動距離以及在體外穿過人工基底膜的細胞數量均比未被抑制G3BP1表達的A549細胞顯著下降(P<0.05)。最后,免疫印跡法檢測在GLC-82、H1299以及NCI-H358細胞中,G3BP1的表達水平并不一致,具體表現為G3BP1在GLC-82以及H1299中表達水平升高,而在NCI-H358中表達水平降低。
   結

8、論:G3BP1在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231中表達水平異常升高,而其表達被抑制后MDA-MB-231的趨化以及定向運動能力均顯著下降,表明G3BP1很有可能參與了乳腺癌細胞MDA-MB-231的遷移過程,并在該過程中發(fā)揮重要作用。由于PKCζ及其信號通路下游分子Akt的磷酸化水平隨外源趨化因子刺激時間增加而增加,且G3BP1與PKCζ存在相互作用,故推測G3BP1可能通過PKCζ-Akt信號通路參與了MDA-MB-231的遷移過程

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