MTDH在脂多糖促進(jìn)乳腺癌遷移侵襲中作用的研究.pdf

1、目的：乳腺癌是全世界范圍內(nèi)女性最常見的惡性腫瘤之一，而其發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是預(yù)后較差的主要原因。炎癥刺激在乳腺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過程中起到重要的作用，臨床研究發(fā)現(xiàn)乳腺實(shí)體腫瘤中存在炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，但目前對(duì)該現(xiàn)象及機(jī)制尚未明確。我們前期研究發(fā)現(xiàn)Metadherin(MTDH)在乳腺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著極其重要的作用，本實(shí)驗(yàn)擬通過脂多糖模擬炎癥微環(huán)境，誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生相應(yīng)反應(yīng)，研究MTDH在炎癥反應(yīng)過程中對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移侵襲能力的影響，并初步探討其具

2、體的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real time PCR)及免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞系中LPS刺激后MTDH和Toll樣受體4(TLR4)等mRNA及蛋白表達(dá)水平的變化。通過用shRNA的方法選取干擾序列，構(gòu)建干擾載體，用脂質(zhì)體2000的方法轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231，沉默MTDH基因的表達(dá)，穩(wěn)定篩選MTDH低表達(dá)的MDA-MB-231細(xì)胞系。通過細(xì)胞

3、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè)MTDH基因沉默后，在脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中細(xì)胞遷移侵襲能力的改變。通過文獻(xiàn)檢索和Real time PCR和Western blot等方法篩選遷移侵襲的相關(guān)分子通路，初步闡明MTDH在炎癥介導(dǎo)乳腺癌遷移侵襲過程中的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 結(jié)果：在TLR4陽性的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231，MDA-MB-468，MCF-7中，LPS的刺激后，MTDH的mRNA及蛋白表達(dá)水平均

4、明顯上調(diào)。通過研究MTDH沉默的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在無LPS刺激時(shí)，MTDH沉默的MDA-MB-231細(xì)胞遷移侵襲能力較對(duì)照組明顯下降；在加入LPS刺激時(shí)，MTDH沉默的MDA-MB-231細(xì)胞遷移侵襲能力無明顯改變，但對(duì)照組細(xì)胞遷移侵襲能力明顯增強(qiáng)。以上結(jié)果說明MTDH在LPS介導(dǎo)的乳腺癌遷移侵襲中發(fā)揮著重要的作用。然而在TLR4陰性的細(xì)胞系T47D中，LPS的刺激后MTD

5、H的表達(dá)量和細(xì)胞的遷移侵襲能力均無變化。以上結(jié)果顯示MTDH在脂多糖介導(dǎo)乳腺癌遷移侵襲能力的改變是通過TLR4信號(hào)傳導(dǎo)通路的作用。通過對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)通路篩選進(jìn)一步的分析，我們發(fā)現(xiàn)MTDH基因的沉默可以抑制LPS誘導(dǎo)的NF-kappaB通路的激活，并可以抑制LPS誘導(dǎo)的IL-8、MMP-9的分泌。這提示在炎癥促進(jìn)乳腺癌的遷移侵襲中，MTDH可通過炎癥誘導(dǎo)的NF-kappaB通路影響乳腺癌的遷移侵襲能力的改變。
　　 結(jié)論及意義：MTD