Rap1及Ras在細(xì)胞粘附連接中的功能研究.pdf

1、H-Ras和Rap1屬Ras超家族小分子量G蛋白，對細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、細(xì)胞骨架重排等基本生命活動起重要的調(diào)控作用。近來發(fā)現(xiàn)二者在許多細(xì)胞功能上具有拮抗作用，同時由于二者均存在細(xì)胞膜和細(xì)胞連接位點的定位，且對細(xì)胞粘附連接具有相互拮抗的調(diào)控作用，因此為探討Rap1和H-Ras在細(xì)胞粘附連接形成中拮抗作用的機(jī)制，本文通過鈣離子轉(zhuǎn)換實驗(calcium switch experiments)研究了乳腺癌細(xì)胞系MCF7中隨著粘附連接的重建H

2、-Ras和Rap1細(xì)胞內(nèi)定位及相互作用蛋白的改變。
　　在正常培養(yǎng)條件下GFP-H-Ras、GFP-Rap1以及E-cadherin在MCF7細(xì)胞具有明顯的膜定位，并在細(xì)胞間連接處呈現(xiàn)富集；除此之外GFP-Rap1以及E-cadherin還存在細(xì)胞內(nèi)的定位方式。在低鈣條件下細(xì)胞偽足消失，細(xì)胞間的接觸減少， E-cadherin和 GFP-Rap1的膜定位明顯下降，彌散分布于細(xì)胞內(nèi)和質(zhì)膜上；而GFP-H-Ras的細(xì)胞膜定位并沒有隨著

3、細(xì)胞連接的消失發(fā)生改變。當(dāng)恢復(fù)正常培養(yǎng)條件后，Rap1和E-cadherin均恢復(fù)膜定位，而Rap1要早于E-cadherin恢復(fù)，說明Rap1可能通過招募E-cadherin到細(xì)胞膜從而對依賴于E-cadherin的粘附連接形成有正調(diào)控作用。而 H-Ras對粘附連接的調(diào)控作用可能與 E-cadherin的定位無直接關(guān)系。
　　同時我們通過pull down方法對在鈣離子轉(zhuǎn)換發(fā)生前后H-Ras與Rap1的共同相互作用蛋白進(jìn)行了分別