姜黃素增強(qiáng)低強(qiáng)度超聲殺傷鼻咽癌細(xì)胞的實(shí)驗研究.pdf

1、目的：鼻咽癌是我國南方乃至東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一,放化療成為其主要的治療手段,然而遠(yuǎn)期療效并不理想,且存在一系列毒副反應(yīng)。姜黃素是中草藥姜黃的主要活性成分,可抑制體內(nèi)外多種腫瘤細(xì)胞的生長,其抗癌譜廣,毒副作用小,是一種具有良好應(yīng)用前景的天然抗癌新藥,且有研究報道可見光能增強(qiáng)姜黃素的細(xì)胞毒性,因此姜黃素可作為一種有效的光敏劑。大量研究表明,聲動力治療由于其穿透力強(qiáng)、毒副作用低等優(yōu)點(diǎn)己成為繼光動力治療之后又一新興的腫瘤治療方法。然而

2、,姜黃素能否作為增敏劑增強(qiáng)低強(qiáng)度超聲用于腫瘤的治療還有待闡明。本研究旨在通過探討姜黃素增強(qiáng)低強(qiáng)度超聲對鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的殺傷效應(yīng)及其可能機(jī)制,從而為姜黃素聲動力治療提供依據(jù)。
　　 方法：采用倒置顯微鏡觀察和:MTT比色法檢測姜黃素聯(lián)合低強(qiáng)度超聲作用后CNE2細(xì)胞的生長情況；同時利用測溫儀對實(shí)驗中細(xì)胞溶液的溫度進(jìn)行監(jiān)測,以了解細(xì)胞溶液的溫度變化情況；應(yīng)用Hoechst33258細(xì)胞核熒光染色法和Annexin V-FITC細(xì)

3、胞凋亡檢測試劑盒觀察和檢測姜黃素聯(lián)合超聲作用對CNE2細(xì)胞凋亡的影響；通過透射電鏡觀察姜黃素聯(lián)合超聲作用后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化情況；利用Rhodamine123染色法了解細(xì)胞線粒體膜電位的變化情況；最后通過DCFH-DA染色檢測活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成情況。
　　 結(jié)果：當(dāng)姜黃素以10μM的濃度與CNE2細(xì)胞共同孵育1h后,再用劑量為0.46W/cm2×8s的超聲處理,CNE2細(xì)胞的殺

4、傷率比單純姜黃素處理組及單純超聲處理組細(xì)胞殺傷率之和高出了一倍；倒置顯微鏡下觀察,姜黃素聯(lián)合超聲處理組的細(xì)胞數(shù)量較其他三組明顯減少,細(xì)胞固縮,并可見大量細(xì)胞碎片；實(shí)驗中溫度變化監(jiān)測顯示培養(yǎng)液溫度隨超聲作用時間延長而有所升高,但在超聲作用8s時升高幅度不超過5℃:Hoechst33258細(xì)胞核熒光染色顯示姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后6h出現(xiàn)最為明顯的細(xì)胞凋亡,表現(xiàn)為細(xì)胞核凝聚,出現(xiàn)凋亡小體；同時Annexin V-FITC和PI染色后細(xì)胞

5、凋亡檢測發(fā)現(xiàn)姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后6h細(xì)胞的壞死或晚期凋亡率為31.37％而早期凋亡率為2.91％。透射電鏡觀察到姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后6h細(xì)胞出現(xiàn)壞死和凋亡小體,線粒體高度腫脹；Rhodamine123染色顯示姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后3h細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位明顯降低；最后DCFH-DA染色對ROS的檢測結(jié)果為姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后3h細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量較其他三組明顯增多。
　　 結(jié)論：姜黃素能顯著增強(qiáng)低強(qiáng)度