姜黃素增強低強度超聲殺傷鼻咽癌細胞的實驗研究.pdf

1、目的：鼻咽癌是我國南方乃至東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一,放化療成為其主要的治療手段,然而遠期療效并不理想,且存在一系列毒副反應(yīng)。姜黃素是中草藥姜黃的主要活性成分,可抑制體內(nèi)外多種腫瘤細胞的生長,其抗癌譜廣,毒副作用小,是一種具有良好應(yīng)用前景的天然抗癌新藥,且有研究報道可見光能增強姜黃素的細胞毒性,因此姜黃素可作為一種有效的光敏劑。大量研究表明,聲動力治療由于其穿透力強、毒副作用低等優(yōu)點己成為繼光動力治療之后又一新興的腫瘤治療方法。然而

2、,姜黃素能否作為增敏劑增強低強度超聲用于腫瘤的治療還有待闡明。本研究旨在通過探討姜黃素增強低強度超聲對鼻咽癌細胞株CNE2的殺傷效應(yīng)及其可能機制,從而為姜黃素聲動力治療提供依據(jù)。
　　 方法：采用倒置顯微鏡觀察和:MTT比色法檢測姜黃素聯(lián)合低強度超聲作用后CNE2細胞的生長情況；同時利用測溫儀對實驗中細胞溶液的溫度進行監(jiān)測,以了解細胞溶液的溫度變化情況；應(yīng)用Hoechst33258細胞核熒光染色法和Annexin V-FITC細

3、胞凋亡檢測試劑盒觀察和檢測姜黃素聯(lián)合超聲作用對CNE2細胞凋亡的影響；通過透射電鏡觀察姜黃素聯(lián)合超聲作用后細胞超微結(jié)構(gòu)的變化情況；利用Rhodamine123染色法了解細胞線粒體膜電位的變化情況；最后通過DCFH-DA染色檢測活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成情況。
　　 結(jié)果：當(dāng)姜黃素以10μM的濃度與CNE2細胞共同孵育1h后,再用劑量為0.46W/cm2×8s的超聲處理,CNE2細胞的殺

4、傷率比單純姜黃素處理組及單純超聲處理組細胞殺傷率之和高出了一倍；倒置顯微鏡下觀察,姜黃素聯(lián)合超聲處理組的細胞數(shù)量較其他三組明顯減少,細胞固縮,并可見大量細胞碎片；實驗中溫度變化監(jiān)測顯示培養(yǎng)液溫度隨超聲作用時間延長而有所升高,但在超聲作用8s時升高幅度不超過5℃:Hoechst33258細胞核熒光染色顯示姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后6h出現(xiàn)最為明顯的細胞凋亡,表現(xiàn)為細胞核凝聚,出現(xiàn)凋亡小體；同時Annexin V-FITC和PI染色后細胞

5、凋亡檢測發(fā)現(xiàn)姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后6h細胞的壞死或晚期凋亡率為31.37％而早期凋亡率為2.91％。透射電鏡觀察到姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后6h細胞出現(xiàn)壞死和凋亡小體,線粒體高度腫脹；Rhodamine123染色顯示姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后3h細胞內(nèi)線粒體膜電位明顯降低；最后DCFH-DA染色對ROS的檢測結(jié)果為姜黃素聯(lián)合超聲組在超聲處理后3h細胞內(nèi)活性氧的含量較其他三組明顯增多。
　　 結(jié)論：姜黃素能顯著增強低強度