姜黃素對口腔鱗癌細胞生長增殖及相關(guān)蛋白影響的實驗研究.pdf

1、研究目的：旨在建立人類口腔鱗狀細胞癌 (oral squamous cell carcinoma，OSCC)細胞系，確定其組織來源，并研究姜黃素對鱗癌細胞的相關(guān)毒性作用，對作用后的細胞形態(tài)、生長周期、核轉(zhuǎn)錄因子蛋白及細胞周期蛋白的表達等進行一系列生物學特性檢測。 研究方法：①原代培養(yǎng)消化法將病理確診的口腔鱗癌組織經(jīng)胰蛋白酶、螯合劑(EDTA)作用，分散成單細胞懸液，加入含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置5％CO<,

2、2>、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育；②倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)細胞的形態(tài)；③細胞類型鑒定免疫組織化學法檢測培養(yǎng)細胞的CD44表達情況，以確定其組織和細胞來源；④將不同濃度的姜黃素加入處于生長指數(shù)期的鱗癌細胞中，作用24-48小時后檢測藥物對細胞的相關(guān)影響，包括細胞毒性作用、細胞形態(tài)變化、凋亡、生長周期及核轉(zhuǎn)錄因子蛋白、細胞周期蛋白表達的變化。 研究結(jié)果：①成功培養(yǎng)口腔鱗癌原代細胞，鏡下示腫瘤細胞呈多角形、短梭形；免疫組化示CD44表達陽性，結(jié)

3、合病理活檢結(jié)果，確定為鱗癌細胞；②5，10，20mg/L濃度的姜黃素具細胞毒性作用，24小時后即出現(xiàn)單位面積細胞數(shù)量減少、細胞間連接消失，胞體變小、變圓或形狀不規(guī)則，核固縮，胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，出現(xiàn)凋亡小體等現(xiàn)象；③細胞生長增殖受限制，抑制率隨藥物濃度漸增加；流式分析儀測得細胞出現(xiàn)凋亡率，G2/M期發(fā)生阻滯，S及G2/M期比例漸增加，而G0/G1比例逐漸減少，上述變化均與藥物濃度呈正相關(guān)；④NF-κB、cyclin D1陽性細胞數(shù)減