基因芯片技術(shù)在HPV18 E6 siRNA誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡機(jī)制研究及HPV檢測分型中的應(yīng)用.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文基因芯片技術(shù)在HPV18E6siRNA誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡機(jī)制研究及HPV檢測分型中的應(yīng)用姓名：危敏申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：馬文麗20060609摘要11，42，43和44型；高危型主要包括HPVl6，18，31，33，34，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68和70型。HPV能引起臨床上從良性損害到腫瘤的許多疾病。低危型HPV感染常引起被感染者出現(xiàn)尋常疣和肛門

2、生殖器尖銳濕疣等病變，一般不發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。高危型HPV感染是弓I起宮頸癌的主要原因，其中HPVl6和18型最為常見。高危型HPV的蜀6、E7基因在宮頸癌的發(fā)生中起關(guān)鍵作用，作為潛在的癌基因，具有細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，其編碼的HPVE6、E7蛋白持續(xù)表達(dá)是維持體外培養(yǎng)細(xì)胞永生化所必需的條件。研究發(fā)現(xiàn)高危型HPVE6蛋白在E6相關(guān)蛋白(E6associatedprotein，E6AP)的介導(dǎo)下與野生型腫瘤抑制蛋白P53具有高度親和性，二者極易結(jié)合使

3、P53快速降解，從而失去對細(xì)胞生長周期的正常調(diào)控而引起細(xì)胞無限增殖并向惡性轉(zhuǎn)化。視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(rctino№mmaprotehpRb)是另一種重要的生長抑制蛋白，在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用，主要通過抑制E2F轉(zhuǎn)錄因子活性達(dá)到抑制細(xì)胞增殖的目的。HPVE7蛋白通過結(jié)構(gòu)上的pRb結(jié)合位點(diǎn)，優(yōu)先與非磷酸化的pRb結(jié)合，這種高親和性使pRbE2F復(fù)合物解離，游離的E2F從而發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄因子的作用，轉(zhuǎn)錄細(xì)胞由G1期進(jìn)入s期所需的基因，導(dǎo)致細(xì)胞

4、周期調(diào)節(jié)失控，細(xì)胞發(fā)生永生化。近年來的研究熱點(diǎn)RNA干擾(RNAjIlterference，RNAi)技術(shù)可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)反義核酸進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后基因沉默，將與內(nèi)源mRNA序列相對應(yīng)的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞，可使內(nèi)源mRNA降解和基因沉默。與反義寡核苷酸和核酶的抑制效果相比，RNAi技術(shù)抑制基因表達(dá)具有更高的效率，無論是在體內(nèi)還是體外實(shí)驗(yàn)中，僅需少量的dsRNA(每個細(xì)胞幾個分子)就能有效的抑制靶基因表達(dá)，抑