HPV分型檢測(cè)寡核苷酸芯片的初步研究.pdf

1、背景 人類乳頭狀瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)屬于Papovaviridae家族，是一種雙鏈環(huán)狀DNA病毒，大小約8000bp，目前已發(fā)現(xiàn)了200多種亞型。HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因，持續(xù)高危型HPV的感染是癌前病變和浸潤(rùn)性宮頸癌發(fā)展的必要因素。由于不同亞型HPV的致病機(jī)制和致癌危險(xiǎn)性各不相同，因此對(duì)HPV各亞型進(jìn)行分型檢測(cè)有重要的臨床意義。目前，臨床上對(duì)HPV進(jìn)行分型檢測(cè)主要依靠熒光實(shí)時(shí)PCR技

2、術(shù)，但該方法檢測(cè)通量低，一個(gè)反應(yīng)管中只能檢測(cè)一個(gè)亞型，難以滿足臨床上同時(shí)檢測(cè)多個(gè)亞型的需要。本研究探討了利用寡核苷酸芯片技術(shù)同時(shí)檢測(cè)HPV多個(gè)亞型的可能。 目的 建立帶有不同亞型HPVL1基因片段的哺乳動(dòng)物細(xì)胞克?。辉诖嘶A(chǔ)上初步探討利用寡核苷酸芯片技術(shù)對(duì)HPV的分型檢測(cè)的可能。 方法 1、建立帶有不同亞型HPVL1基因片段的哺乳動(dòng)物細(xì)胞克隆用做標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照。 2、收集NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的HPV各亞

3、型的序列信息，設(shè)計(jì)相應(yīng)的探針。 3、利用基因芯片技術(shù)及熒光定量PCR方法對(duì)HPV進(jìn)行分型檢測(cè)。 結(jié)果 1、成功克隆了30個(gè)宮頸癌相關(guān)亞型HPVL1基因片段，成功構(gòu)建并篩選出6個(gè)攜帶有HPV各亞型L1基因片段的細(xì)胞株。 2、初步制備出可以分型檢測(cè)HPV的寡核苷酸芯片并建立了相應(yīng)的檢測(cè)方法。 結(jié)論 應(yīng)用重疊延伸PCR的方法，成功克隆了30個(gè)宮頸癌相關(guān)亞型HPVL1基因片段并構(gòu)建6個(gè)攜帶有HPV