HPV18 E6基因特異性沉默對宮頸癌HeLa細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:探討化學合成siRNA沉默HPV18 E6基因?qū)θ藢m頸癌細胞系HeLa細胞增殖和凋亡的影響。 方法:化學合成兩條靶向HPV18 E6的siRNA序列，用脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染HeLa細胞，同時設立脂質(zhì)體細胞對照。半定量RT-PCR檢測HPV18E6基因沉默對E6基因自身及宮頸癌特異性人半翼基因(human wings apart-like，hWAPL)轉(zhuǎn)錄表達的影響。四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法測定細胞增殖活性。細胞免疫化學技

2、術檢測p53蛋白表達水平的變化。流式細胞技術(FCM)檢測細胞周期變化及細胞凋亡。透射電鏡觀察轉(zhuǎn)染后細胞超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果:MTT檢測結(jié)果顯示20nM、50nM和80nM終濃度轉(zhuǎn)染后細胞增殖活性均有下降，以50nM濃度轉(zhuǎn)染時細胞活性下降最為顯著。RT-PCR檢測結(jié)果顯示，各時間點E6和hWAPL基因轉(zhuǎn)錄表達水平與細胞對照組比較均有降低，以48h時降低最為明顯。細胞免疫化學結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后p53蛋白表達水平增高。流式細胞分析顯示轉(zhuǎn)