姜黃素抑制培養(yǎng)的人胚胎視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖及炎前因子分泌的實驗研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文姜黃素抑制培養(yǎng)的人胚胎視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖及炎前因子分泌的實驗研究姓名：龔凌申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：姜德詠2004040130min收集玻片；③姜黃素組，分為5ug／ml和10ug／ml兩個濃度，15h后收集玻片：④空白對照組(O4％FBSDMEM／F一12)。計數(shù)核熒光陽性者細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。6、用基于ELISA的NF—KBp65活性測定試劑盒觀察經(jīng)不同處理的hfRPE細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF—K

2、B活性：hfRPE細(xì)胞經(jīng)含04％FBS的DMEM／F12同步后分為七組：(DrhIL一1B5ng／ml干預(yù)組，加藥30min后收集細(xì)胞；(窯)rhIL～1B5ng／ml姜黃素組，分5ug／ml和10ug／ml兩個濃度，先加姜黃素預(yù)處理1h，再加入rhILiB干預(yù)30min收集細(xì)胞；@rhIL一1B5ng／mlPDTC組，分5pg／ml和101tg／ml兩個濃度，先加PDTC預(yù)處理1h，再加入rhIL一1B干預(yù)30min收集細(xì)胞；④空白對

3、照組(04％FBSD肛M／F一12)；⑤姜黃素組，只分別加入5pg／ml和10|lg／ml姜黃素；(亙)PDTC組，只分別加入5ug／m1和10ug／mlPDTC；⑦陽性對照組，加入10％FBS30min后收集細(xì)胞。所有標(biāo)本按試劑盒說明提取全細(xì)胞蛋白并定量后檢測NF—KB活性。結(jié)果1、姜黃素以劑量和時間依賴方式抑制hfRPE細(xì)胞增殖。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，251tg／ml以上濃度姜黃素均能顯著抑制hfRPE細(xì)胞增殖，24h和48h半數(shù)抑制濃度(

4、I％)分別為1427ug／ml和127ug／ml。姜黃素抑制hfRPE細(xì)胞增殖具有時間和劑量依賴性。2、姜黃素誘導(dǎo)hfRPE細(xì)胞發(fā)生G。朋期阻滯，未出現(xiàn)凋亡峰。3、rhILI(5ng／m1)組hfRPE細(xì)胞分泌的I乙8和slCAM一1分別比空白對照組升高了20倍和8倍，加入姜黃素能顯著抑制其分泌。5ug／ml姜黃素使IL一8和slCAM一1含量分別降低了3688％和1490％，10lag／ml則分別達(dá)到5573％和4178％。姜黃素本身

5、不刺激hfRPE細(xì)胞分泌IL8和sICAM一1。4、ILI13刺激hfRPE細(xì)胞30min后出現(xiàn)p65核染色，90％細(xì)胞核p65染色陽性；加入姜黃素5ug／ml和10ug／m1分別使細(xì)胞核p65染色陽性細(xì)胞減少了12％和23％。5、IO％FBS使hfRPE細(xì)胞NF—KB活性升高了51倍。IL—lB刺激的hfRPE細(xì)胞NFKB活性升高了31倍，姜黃素和PDTC都顯著抑制了這個效應(yīng)。5ug／ml姜黃索和PDTC分別使IL一1B刺激的hfRP