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1、目的:觀察冷凍處理后的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞,(human retinal pigment epithelium cells, RPE)在體外培養(yǎng)和體內(nèi)玻璃體環(huán)境中分泌肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor, HGF)水平的變化,調(diào)查含有冷凍后RPE細(xì)胞的玻璃體對(duì)正常RPE細(xì)胞的促增生作用;評(píng)估低分子肝素鈉(Fragmin)抑制冷凍后的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分泌人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的作用.方法:體外培養(yǎng)的RPE細(xì)胞在-
2、80℃下進(jìn)行冷凍,冷凍時(shí)間分為0s、15s和60s,隨后繼續(xù)體外培養(yǎng)(體外實(shí)驗(yàn)組)和注入正常兔眼玻璃體,第6d時(shí)取出玻璃體液加入到正常RPE細(xì)胞培養(yǎng)液中(體內(nèi)實(shí)驗(yàn)組);每實(shí)驗(yàn)組再分為二個(gè)亞組:Fragmin治療(Fragmin終濃度25ul/ml)組和未治療組,在3d、6d時(shí)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清和玻璃體樣本,ELISA法測(cè)定HGF含量,MTT法(波長(zhǎng)570nm)測(cè)定48h后加入玻璃體液孵育RPE細(xì)胞后的增殖狀態(tài).應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)
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