基于PSCA的前列腺癌治療性DNA疫苗的研究.pdf

1、中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文基于PSCA的前列腺癌治療性DNA疫苗的研究姓名：張曉鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳薇20070524中文摘要基于PSCA的前列腺癌治療性疫苗的研究(摘要)本研究選擇PSCA0rostatestemcellantigen，前列腺干細(xì)胞抗原)作為治療靶點(diǎn)，以人源的HSP70(heatshockprotein70，熱休克蛋白)作為增強(qiáng)免疫反應(yīng)的佐劑，構(gòu)建了用于前列腺癌治療用的DNA疫苗

2、。通過(guò)在小鼠模型上系統(tǒng)地檢測(cè)DNA疫苗的免疫效果，評(píng)價(jià)PSCA作為治療靶點(diǎn)的可行性，以及HSP70分子是否能夠增強(qiáng)DNA疫苗的免疫效果。在此基礎(chǔ)上，系統(tǒng)地研究了HSP70與抗原不同的耦聯(lián)方式對(duì)疫苗效果的影響，并探索了HSP70作為DNA疫苗佐劑的免疫機(jī)理，以期為進(jìn)一步的臨床研究鋪平道路。為了構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒，首先從人前列腺癌細(xì)胞株DUl45的cDNA中擴(kuò)增出了PSCA與HSP70的基因，進(jìn)而克隆至pcDNA31()載體，構(gòu)建了pc—PS

3、CA、pc—HSP、pcPSCAHSP和pcHSPPSCA四種質(zhì)粒，并通過(guò)測(cè)序和RTPCR方法確認(rèn)了質(zhì)粒的序列正確和表達(dá)情況。為了評(píng)價(jià)免疫DNA疫苗后的體液免疫反應(yīng)，在大腸桿菌系統(tǒng)中表達(dá)了PSCA和HSP70的重組蛋白，并經(jīng)過(guò)色譜層析技術(shù)獲得了具有一定純度的重組蛋白。隨后構(gòu)建了表達(dá)人PSCA的小鼠前列腺癌細(xì)胞株Rlvl—PSCA，并建立了小鼠荷瘤模型。免疫C57BL／6小鼠后，通過(guò)ELISPOT、胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)、CTL細(xì)胞活性檢測(cè)和E

4、LISA等手段檢測(cè)了針對(duì)PSCA的細(xì)胞免疫和體液免疫水平。研究結(jié)果表明，免疫pcPSCAHSP、pc—HSP—PSCA和pcPSCApc—HSP混合質(zhì)粒均能夠激起強(qiáng)烈的PSCA特異的細(xì)胞免疫反應(yīng)，并且能夠抑Nd鼠體內(nèi)PSCA表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間。將PSCA融合到HSP70基因的N端能夠獲得最好的細(xì)胞免疫效果，但是各組之間PSCA的抗體水平?jīng)]有差異。為了研究HSP70分子增強(qiáng)疫苗效果的免疫機(jī)理，我們通過(guò)特異性多肽刺激的方