羥氯喹對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者漿細胞樣樹突狀細胞及DNA甲基化的影響.pdf

1、目的：研究羥氯喹(hydroxy chloro quine,HCQ)對系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupuseryth ematosus,SLE)患者外周血漿細胞樣樹突狀細胞(plasmacytoi ddendritic cells,pDC)及DNA甲基化水平的影響,初步探究HCQ在SLE治療中的作用機制。
　　方法：收集2011年3月至2012年3月我院門診或住院SLE患者45例,診斷均符合1997年美國風濕病學會(ACR

2、)修訂的SLE分類標準。根據治療情況將SLE患者分為三組:1)新發(fā)未治療組(15例);2)單用小劑量強的松(≤10mg/d)組(15例);3)小劑量強的松(≤10mg/d)+HCQ(400mg/d)組(15例)。依據系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(SLEDAI)對其疾病活動進行評分,20例患者SLEDAI積分>5分為活動期,25例患者SLEDAI積分≤5分為穩(wěn)定期。另收集健康對照15名,SLE患者和健康對照在性別和年齡上相匹配。
　　

3、清晨空腹采集EDTA抗凝靜脈血15ml,密度梯度離心法分離SLE患者和正常對照外周血單核細胞(PBMC),同時留取血清。流式細胞術檢測外周血pDC水平及其表面CD32、CD40、CD86、BDCA2、BDCA4、CD62L、CXCR4分子的表達;抽提PBMC基因組DNA,采用整體甲基化定量試劑盒檢測基因組DNA甲基化水平;提取總RNA,實時熒光定量PCR法檢測DNA甲基化轉移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3BmRNA的表達量

4、;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中IFN-α、IL-6、TNF-α的濃度。
　　結果：SLE患者外周血pDC水平顯著低于正常對照組(P<0.001),其中活動組患者pDC水平顯著低于穩(wěn)定組(P<0.05),SLE患者中有關節(jié)炎、蛋白尿或白細胞減低者外周血pDC水平顯著低于無上述臨床表現者(P<0.01、P<0.05、P<0.05),且pDC水平與蛋白尿呈顯著負相關(r=-0.359,P<0.05)。
　　未治療組SLE

5、患者外周血pDC水平顯著低于正常對照組(P<0.001),單用強的松組pDC水平與未治療組患者相比,差異無統(tǒng)計學意義,強的松+HCQ組pDC水平顯著高于未治療組和單用強的松組患者(P<0.01、P<0.01);未治療組SLE患者外周血pDC表面CD32、CD86、CXCR4、BDCA4分子表達水平較正常對照組顯著升高(P<0.01、P<0.05、P<0.05、P<0.05),強的松+HCQ組pDC表面CD32、CXCR4表達水平較未治療

6、組及單用強的松組均顯著降低(P<0.01、P<0.05;P<0.05、P<0.001)。
　　SLE患者PBMC基因組DNA甲基化水平顯著低于正常對照組(P<0.01),但活動組與穩(wěn)定組之間差異無統(tǒng)計學意義。未治療組與單用強的松組及正常對照組DNA甲基化水平差異無統(tǒng)計學意義;強的松+HCQ組DNA甲基化水平較未治療組和單用強的松組顯著降低(P<0.01、P<0.05)。SLE患者PBMC中DNMT1mRNA表達水平顯著低于正常對照

7、組(P<0.01),DNMT3BmRNA表達水平明顯高于正常對照組(P<0.01),相關性分析顯示DNMT1mRNA表達與DNA甲基化呈正相關(r=0.232,P<0.05);DNMT1mRNA、DNMT3AmRNA、DNMT3BmRNA表達水平在未治療組及各治療組之間,差異均無統(tǒng)計學意義。
　　SLE患者血清IFN-α、IL-6水平顯著高于正常對照組(P<0.05、P<0.05),其中活動組SLE患者血清IFN-α水平顯著高于穩(wěn)

8、定組(P<0.05);未治療組SLE患者血清IFN-α水平顯著高于正常對照組(P<0.05),單用強的松組和強的松+HCQ組IFN-α水平均顯著低于未治療組(P<0.01、P<0.05),但二者之間差異無統(tǒng)計學意義;血清IL-6、TNF-α水平在未治療組與各治療組之間,差異均無統(tǒng)計學意義。
　　結論：SLE患者外周血pDC水平和DNA甲基化水平顯著降低,pDC表面多種活化、趨化相關分子表達水平明顯升高,DNMT1基因表達降低,IF