CD200R在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者樹(shù)突狀細(xì)胞上的表達(dá)及其功能初探.pdf

1、背景和目的：
　　 CD200是重要的免疫調(diào)節(jié)分子,屬于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成員,表達(dá)于多種細(xì)胞類(lèi)型。由于其缺乏胞內(nèi)信號(hào)序列,需要與受體結(jié)合發(fā)揮作用。CD200的受體包括CD200R1-5,相對(duì)局限分布于髓系來(lái)源的細(xì)胞,如樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。該信號(hào)通路主要通過(guò)髓系細(xì)胞間接調(diào)節(jié)免疫平衡,在過(guò)敏、自身免疫、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、移植排斥等免疫相關(guān)疾病中可能發(fā)揮著重要作用。
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic l

2、upus Erythematous,SLE)是一種多系統(tǒng)受累的自身免疫性疾病,其發(fā)病機(jī)制涉及遺傳背景和環(huán)境因素等諸多方面。包括自身反應(yīng)性T細(xì)胞、B細(xì)胞及凋亡細(xì)胞清除障礙等。樹(shù)突狀細(xì)胞作為主要的抗原提呈細(xì)胞,也參與到SLE發(fā)病的過(guò)程中,表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)量、活化狀態(tài)及功能的異常等。
　　 樹(shù)突狀細(xì)胞是CD200R分布的主要細(xì)胞群,其在該信號(hào)通路的調(diào)控過(guò)程中應(yīng)具有重要作用。而目前關(guān)于CD200/CD200R的研究主要局限于動(dòng)物模型,其在人

3、類(lèi)樹(shù)突狀細(xì)胞功能調(diào)節(jié)及SLE發(fā)病機(jī)制中的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)立足于CD200R分布的主要細(xì)胞群-樹(shù)突狀細(xì)胞,分析SLE中CD200R在其表面表達(dá)的情況,并通過(guò)建立體外細(xì)胞培養(yǎng)模型,研究CD200對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響。闡述該信號(hào)通路在SLE致病機(jī)制中的可能作用。
　　 方法：
　　 明確診斷SLE的患者20例,同期選擇性別年齡匹配的健康對(duì)照17例,采集抗凝外周靜脈血分離單個(gè)核細(xì)胞。
　　 1、用CD11c和CD1

4、23標(biāo)記髓樣樹(shù)突狀細(xì)胞(mDC)和漿樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDC),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SLE患者及健康對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞中樹(shù)突狀細(xì)胞的比例及其表面CD200R表達(dá)的情況。并對(duì)患者進(jìn)行疾病活動(dòng)度評(píng)價(jià),與樹(shù)突狀細(xì)胞表面CD200R表達(dá)率進(jìn)行相關(guān)分析。
　　 2、利用磁珠分選從外周血單個(gè)核細(xì)胞中分離出CD14+單核細(xì)胞,體外誘導(dǎo)培養(yǎng)單核細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(MoDC),然后加入LPS刺激其活化成熟。利用流式細(xì)胞術(shù)分析LPS刺激對(duì)MoDC表面

5、CD200R表達(dá)率的影響。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析加入LPS或LPs+CD200對(duì)MoDC表面活化標(biāo)志表達(dá)的影響；ELISA檢測(cè)不同處理組中IL-6、IL—10水平的變化；借助流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)同種異體混合淋巴反應(yīng)(MLR)中不同處理組的MoDC刺激CD4+淋巴細(xì)胞增殖能力的變化。從而分析CD200對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分
　　 1、SLE患者與健康對(duì)照相比,外周血PBMC中CD11c-CD1

6、23bright細(xì)胞(pDC)比例下降(0.50±0.08％vs.1.59±0.31％,p=0.002),單核細(xì)胞群(Mo)比例升高(18.66±2.77％vs.10.52±1.04％,p=0.014),具有顯著性差異；CD11c+CD123dim細(xì)胞(mDC)比例無(wú)顯著性差異(11.35±1.45％vs.9.39±3.35％,p=0.273)。
　　 2、CD200R在CD11c-CD123bright細(xì)胞(pDC)上表達(dá)的陽(yáng)

7、性率顯著高于CD11c+CD123dim細(xì)胞(mDC)(HC:65.14±4.72％vs27.95±2.00％,p<0.001；SLE:47.97±5.50％vs.20.51±2.87％,p<0.001)。
　　 3、與健康對(duì)照相比SLE患者CD11c+CD123dim細(xì)胞(mDC)及CD11c-CD123bright細(xì)胞(pDC)表面CD200R表達(dá)陽(yáng)性率均顯著降低(mDC20.51±2.87％vs.27.95±2.00％,p

8、=0.046；pDC47.97±5.50％vs.65.14±4.72％,p=0.027)。
　　 4、SLE mDC表面CD200R的表達(dá)陽(yáng)性率與血沉呈負(fù)相關(guān)(r=-.552,R2=0.3043,p=0.041)。
　　 第二部分
　　 1、SLE患者等量外周血中PBMC提取量較健康對(duì)照減少(1.24±0.15×107/30mlvs.4.3±0.77×107/30ml,p<0.001),但單核細(xì)胞誘導(dǎo)成為MoDC

9、的比例顯著高于健康對(duì)照(30.10±5.75％vs.16.90±4.03％,p=0.043)。
　　 2、在SLE患者和健康對(duì)照中,與培養(yǎng)基(M)組相比,MoDC在LPS刺激成熟后,表面CD200R的表達(dá)均顯著下調(diào)(HC中LPS vs.M:CD200R+％53.54±4.74％vs.62.09±5.18％,p<0.001；MFI41.18±2.28 vs.45.50±2.93,p=0.002；MFI×CD200R+％22.53±

10、2.78 vs.28.97±3.58,p<0.001。SLE中LPS vs.M:CD200R+％45.10±7.53％vs.52.33±8.18％,p=0.023；MFI38.79±1.88 vs.43.28±2.37,p=0.015；MFI×CD200R+％18.01±3.64 vs.23.37±4.49,p<0.001)。
　　 3、SLE患者和健康對(duì)照中,LPS活化后,MoDC表面成熟活化標(biāo)記HLA-DR、CD83、CD8

11、6均顯著上調(diào)(p<0.05)；培養(yǎng)上清中IL-6和IL-10的分泌量均顯著增加(p<0.05)；在同種異體單向MLR中刺激CD4+淋巴細(xì)胞增殖的比例均顯著增加(p<0.05)；健康對(duì)照MoDC表面活化標(biāo)記表達(dá)有高于SLE患者的趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
　　 4、健康對(duì)照中,與LPS組相比,LPS+CD200組的MoDC表面成熟活化標(biāo)志HLA-DR、CD83、CD86進(jìn)一步顯著上調(diào)(LPS+CD200 vs.LPS:

12、HLA-DR+％77.45±7.59％vs.75.59±8.22％,p=0.038；CD83+％×MFI14.41±2.71 vs.12.15±2.96,p=0.003；CD86+％×MFI254.78±56.77 vs.228.40±53.95,p=0.009)；培養(yǎng)上清中IL-6分泌量進(jìn)一步顯著增加(297.57±52.86 pg/ml/104 vs.255.04±41.80pg/ml/104,p=0.032),IL-10分泌量顯著

13、降低(24.91±6.03 pg/ml/104 vs.28.29±6.72 pg/ml/104,p=0.024)；MLR中刺激CD4+淋巴細(xì)胞增殖的比例無(wú)顯著變化(15.2±2.6％ vs.14.4±2.3％,p=0.374)。
　　 5、SLE患者中,與LPS組相比,LPS+CD200組的MoDC表面成熟活化標(biāo)記HLA—DR、CD83、CD86無(wú)顯著差異；培養(yǎng)上清中IL-6及IL-10分泌量無(wú)顯著差異；MLR中刺激CD4+淋巴

14、細(xì)胞增殖的比例有下降趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異。上述p均>0.05。
　　 6、健康對(duì)照LPS+CD200組MoDC在MLR中刺激CD4+細(xì)胞增殖比例高于SLE,具有顯著性差異(15.2±2.6％ vs.8.8±1.5％,p=0.049)。
　　 結(jié)論：
　　 SLE患者外周血中樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量減少,其表面CD200R的陽(yáng)性率降低,其中mDC表面CD200R的陽(yáng)性率與血沉呈負(fù)相關(guān)。LPS刺激單核細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞活化后