婦科惡性腫瘤細(xì)胞系RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化及對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：婦科惡性腫瘤細(xì)胞系RASSF1A基因表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化檢測(cè)
　　 目的：研究婦科惡性腫瘤細(xì)胞系Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域家族1A（Ras-association Domain Family 1A Gene，RASSF1A）基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化水平及RASSF1A基因表達(dá)；探討婦科惡性腫瘤細(xì)胞系RASSF1A基因甲基化與其表達(dá)的關(guān)系。
　　 方法：選取9株婦科腫瘤系A(chǔ)27

2、80、Anglne、Caov3、COC1、SKOV3、HEC-1B、Ihsikawa、Hela、Siha為研究對(duì)象，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）技術(shù)及甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（Methylation-specific PCR，MSP）技術(shù)檢測(cè)這9株婦科惡性腫瘤細(xì)胞系中RASSF1A基因mRNA表達(dá)水平及其啟動(dòng)子區(qū)域的DNA甲基化狀態(tài)。
　　 結(jié)果：在A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ish

3、ikawa細(xì)胞系中RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)域存在DNA超甲基化，在COC1、Hela和Siha中RASSF1A啟動(dòng)子區(qū)域存在DNA部分甲基化。同時(shí)檢測(cè)到A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ishikawa細(xì)胞系中RASSF1A表達(dá)水平極低，而COC1、Hela和Siha中RASSF1A表達(dá)水平較高。
　　 結(jié)論：婦科腫瘤細(xì)胞系中普遍存在RASSF1A基因甲基化，RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA高甲

4、基化是抑制其表達(dá)的機(jī)制之一。
　　 第二部分：5－雜氮－2'－脫氧胞苷對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞系RASSF1A基因甲基化及其表達(dá)的影響
　　 目的：探討去甲基化試劑5－雜氮－2'-脫氧胞苷(5-2aza-CdR)對(duì)卵巢癌細(xì)胞系SKOV3中RASSF1A基因的甲基化及表達(dá)的影響和對(duì)SKOV3細(xì)胞的增殖活性和侵襲能力的影響。
　　 方法：用MSP、RT-PCR分別檢測(cè)5-2aza-CdR對(duì)SKOV3細(xì)胞系干預(yù)前后細(xì)胞系

5、RASSF1A基因甲基化狀態(tài)及mRNA轉(zhuǎn)錄情況。用四唑鹽比色法（MTT法）檢測(cè)處理前后SKOV3細(xì)胞系的增殖活性，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)用來(lái)觀察5-2aza-CdR對(duì)SKOV3細(xì)胞系侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1. 經(jīng)5-2aza-CdR去甲基化處理后，SKOV3細(xì)胞系的RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA未甲基化水平上升，甲基化水平降低；5-2aza-CdR處理后其mRNA轉(zhuǎn)錄水平較未處理者升高。