抵抗素通過p65-K8抑制HepG2細胞中糖原的累積.pdf

1、作為肥胖和胰島素抵抗之間重要鏈接的脂肪組織特異性分泌因子抵抗素Resistin，可以降低胰島素敏感性，抑制胰島素刺激引起的葡萄糖攝取，其內(nèi)在的機制受多種信號途徑的調(diào)控。Keratin是典型的上皮細胞中間絲蛋白。作為上皮細胞骨架的組成部分，Keratin不僅在維持上皮細胞和組織的穩(wěn)定與完整性方面起著重要作用。而且一些Keratins還具有調(diào)節(jié)功能參與細胞信號通路的調(diào)控，在癌癥診斷中可作為標志物，在臨床應用中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，作為Ke

2、ratin家族重要一員的Keratin8在糖代謝方面也發(fā)揮著重要作用。在小鼠正常肝細胞和肝癌細胞中敲除K8/K18后，能促進細胞中胰島素刺激引起的葡萄糖積累，但其機制并不清楚，尤其是Keratin8介導的Resistin對糖代謝的影響。本文通過實時熒光定量PCR、雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測及染色質(zhì)免疫共沉淀等方法較系統(tǒng)的研究了HepG2細胞中Keratin8對糖代謝的影響及Resistin對Keratin8基因表達的調(diào)控作用。獲得如下結(jié)果:

3、
　　1、細胞瞬時轉(zhuǎn)染和基因敲減結(jié)果證明，Resistin抑制HepG2細胞中糖原的積累，敲減Keratin8能夠促進糖原的積累，同時能回復Resistin對糖原積累的抑制作用。
　　2、生物信息學方法分析表明，Keratin8基因啟動子區(qū)具有典型的p65結(jié)合元件。雙熒光素酶報告系統(tǒng)及ChIP實驗分析證明，p65可與Keratin8啟動子特異結(jié)合上調(diào)Keratin8的轉(zhuǎn)錄表達。
　　3、不同濃度重組Resistin處理