人參皂甙Rg3對不同氧供條件下人喉鱗癌細胞（Hep-2）的增殖及HIF-1α和VEGF表達的影響.pdf

1、目的：探討人參皂甙Rg3在常氧、低氧條件下對人喉鱗癌細胞(Htep-2)增殖與凋亡的作用，以及對缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia Inducible Factor 1 alpha，HIF-1α)皮細胞生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表達的影響，為中藥治療喉鱗癌以及以低氧作為喉鱗癌治療的新靶點提供重要的研究依據(jù)。 方法：模擬低氧條件(37℃，5％CO2，1％O2，94％N

2、2)，以人參皂甙Rg3作為干預(yù)因素，選擇順鉑作為陽性對照。將人喉鱗癌細胞(Hep-2)分為六組，即A：常氧對照組；B：常氧人參皂甙Rg3組；C：常氧順鉑對照組；D：低氧對照組；E：低氧人參皂甙Rg3組；F：低氧順鉑對照組。采用MTT法分別檢測不同濃度的人參皂甙Rg3和順鉑在不同作用時間下對人喉鱗癌細胞(Hep-2)增殖的抑制作用，以確定本實驗的最佳實驗濃度與時間。采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標記法(TUNEL)檢測不同氧條

3、件下，藥物作用后細胞凋亡情況；采用流式細胞術(shù)檢測人參皂甙Rg3在不同氧條件下對Hep-2細胞周期以及凋亡的影響；采用RT-PCR、免疫細胞化學以及流式細胞術(shù)檢測人參皂甙Rg3在不同氧條件下對HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表達的影響。 結(jié)果： 1.人參皂甙Rg3及順鉑在不同氧條件下對Hep-2細胞生長的影響MTT結(jié)果顯示：人參皂甙Rg3在低氧、常氧條件下對人喉鱗癌細胞Hep-2的生長均有抑制作用，且隨著Rg3作用濃

4、度的增加，抑制作用增強。各實驗組與對照組相比均有顯著差異(P＜0.05)；并且Rg3低氧條件下對人喉鱗癌細胞Hep-2的抑制率低于常氧條件下對人喉鱗癌細胞Hep-2的抑制率。 常氧條件下，順鉑3μg/ml的對Hep-2的抑制率(21.40±2.03)％與Rg3 300μg/ml的抑制率(19.71±1.32)％無顯著性差別(P＞0.05)，所以選擇順鉑3μg/ml、Rg3 300μg/ml作為實驗濃度。300μg/ml濃度下的人

5、參皂甙Rg3分別作用12h、24h、48h和72h后，對人喉鱗癌細胞的抑制率無顯著性差異。因此，選擇24h作為作用時間。 2.人參皂甙Rg3及順鉑在不同氧條件下對Hep-2細胞周期的影響常氧培養(yǎng)細胞周期分布以G1期為主，S期次之，G2/M期最少；低氧條件下處于G0/G1期的細胞明顯增多，S期和G2/M期細胞減少。Rg3處理后，低氧、常氧兩種培養(yǎng)條件下的細胞分布G0/G1期細胞減少，S期和G2/M期細胞增多(P＜0.05)。

6、 3.人參皂甙Rg3及順鉑在不同氧條件下對Hep-2細胞凋亡的影響經(jīng)TUNEL染色，常氧、低氧條件下，用藥組均可見大量凋亡細胞，呈褐色，細胞圓形或梭形；低氧Rg3組凋亡指數(shù)(AI)(13.78±0.53)％明顯高于低氧對照組(1.02±0.2)％，但低于常氧Rg3組(18.15±0.96)％。 流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，低氧、常氧兩種培養(yǎng)條件下，Rg3組凋亡率較對照組明顯增加(P＜0.05)，且低氧Rg3組凋亡率(7.62±0.95

7、)％低于常氧Rg3組(16.58±0.55)％(P＜0.05)。 4.人參皂甙Rg3及順鉑在不同氧條件下對Hep-2中HIF-1α表達的影響RT-PCR結(jié)果顯示低氧條件下，HIF-1α mRNA的表達明顯高于常氧。低氧條件下，Rg3組降低了HIF-1α mRNA的表達(P＜0.05)，順鉑組與對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)。 免疫細胞化學和流式細胞術(shù)結(jié)果均顯示，低氧條件下，HIF-1α蛋白的表達明顯高于常氧；Rg

8、3和順鉑組中HIF-1α蛋白的表達弱于對照組(P＜0.05)，Rg3組與順鉑組之間無顯著性差異(P＞0.05)。 5.人參皂甙Rg3及順鉑在不同氧條件下對Hep-2中VEGF表達的影響RT-PCR結(jié)果可見低氧條件下， VEGF mRNA的表達明顯高于常氧。低氧條件下，Rg3組降低了VEGF mRNA的表達(P＜0.05)，順鉑組與對照組相比無顯著性差異(P＞0.05)。 免疫細胞化學和流式細胞術(shù)結(jié)果均顯示，低氧條件下，V

9、EGF蛋白的表達明顯高于常氧；Rg3和順鉑組中VEGF蛋白的表達弱于對照組(P＜0.05)，Rg3組與順鉑組之間無顯著性差別(P＞0.05)。 6.經(jīng)Pearson相關(guān)性統(tǒng)計分析，HIF-1α和VEGF蛋白的表達呈顯著正相關(guān)；低氧條件下，HIF-1α蛋白的表達與Hep-2細胞的凋亡率呈顯著負相關(guān)。 結(jié)論： 1.在常氧、低氧不同氧供條件下，人參皂甙Rg3可以通過作用于Hep-2的G2-M期，阻斷細胞S-G2期、G2