喉鱗癌microRNA表達譜變化及miR-125b對喉癌Hep-2細胞增殖影響的研究.pdf

1、第一部分喉鱗癌microRNA表達譜變化及候選靶基因分析
　　 背景：microRNA(微小RNA，簡稱miRNA)是一種非編碼RNA，在惡性腫瘤的基因表達轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。本部分研究miRNA在喉鱗癌組織中表達譜變化，為LSCC研究提供了新的方向。
　　 方法：通過激光顯微切割技術(shù)(LCM)分離6例喉癌組織腫瘤細胞，采用miRNA芯片篩查喉癌組織與癌旁正常組織中miRNA表達譜變化，在48對喉癌組織及癌旁正常組織中

2、，采用實時定量PCR技術(shù)驗證miRNA芯片結(jié)果，通過生物信息學軟件預(yù)測這些差異表達miRNAs的靶基因，在24對喉癌組織中檢測候選基因的表達水平。
　　 結(jié)果：通過miRNA芯片檢測，篩查得到29個差異表達的miRNAs，經(jīng)過實時定量PCR驗證后，有6個被證實包括表達上調(diào)的miR-21、miR-93、miR-205和miR-708，表達下調(diào)的miR-125b和miR-145。使用軟件預(yù)測共有25個候選靶基因，經(jīng)檢測后有10個候選

3、基因在LSCC中表達水平有差異。
　　 結(jié)論：這些差異表達的miRNA在喉癌的發(fā)生和演進過程中可能發(fā)揮了重要作用，并且為miRNA的功能研究提供了方向。
　　 第二部分 miR-125b通過EIF2C2抑制喉癌Hep-2細胞增殖
　　 失控的自主性增殖是惡性腫瘤細胞具有的主要特征之一，細胞周期控制紊亂導致腫瘤細胞增殖調(diào)控異常。本部分在體外和體內(nèi)水平研究上調(diào)miR-125b對喉癌Hep-2細胞增殖的影響及機制。

4、r>　　 方法：采用慢病毒載體構(gòu)建miR-125b表達載體，感染Hep-2細胞后建立能夠穩(wěn)定高表達miR-125b的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株Hep-2-miR-125b和對照細胞株Hep-2-vector，WST-1實驗檢測細胞增殖能力，流式細胞術(shù)檢測細胞周期和凋亡變化。并將Hep-2-miR-125b和Hep-2-vector細胞接種NOD/SCID小鼠，觀察小鼠移植瘤生長情況。采用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)初步驗證EIF2C2(eukaryot

5、ic translation initiation factor2C-2，真核轉(zhuǎn)錄起始因子2C-2)是miR-125b的靶基因，在兩株細胞中檢測候選基因EIF2C2 mRNA表達和蛋白水平變化。
　　 結(jié)果：Hep-2-miR-125b能夠穩(wěn)定、高水平表達miR-125b，miR-125b過表達后能夠抑制Hep-2細胞的增殖能力，抑制NOD/SCID小鼠體內(nèi)成瘤能力，使Hep-2細胞停滯于G0-G1期，凋亡沒有變化。雙熒光素酶報