尼美舒利對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠成瘤的影響及機制研究.pdf

1、目的:盡管包括手術、放療、化療在內(nèi)的各種方法都在不斷改進,但喉鱗狀細胞癌(簡稱喉鱗癌)患者的五年生存率仍較低,它嚴重威脅著人民的生命和健康；并且近年來喉鱗癌的發(fā)病率不但沒有降低,反而有上升且發(fā)病年輕化的趨勢,因而尋找積極有效的預防途徑和治療藥物成為一項十分迫切的重要任務。本實驗通過研究選擇性環(huán)氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)抑制劑尼美舒利(nimesulide,NIM)對喉鱗癌Hep-2細胞裸裸鼠成瘤以及CO

2、X-2、生存素(Survivin)、增殖細胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)表達的影響,以探討NIM抗腫瘤的作用和可能的機制,從而為NIM用于喉鱗癌的預防和治療提供試驗依據(jù)。
　　 方法:對喉鱗癌Hep-2細胞進行傳代培養(yǎng),制成細胞懸液,接種于Balb/c-nu/肌裸鼠右側背部皮下,建立移植瘤模型,12只荷瘤裸鼠隨機分為實驗組(即NIM治療組,腹腔注射NIM50mg/kg/2

3、d,0.2ml)和對照組(腹腔注射生理鹽水,0.2ml),觀察裸鼠生長情況,定期(每兩天)稱量裸鼠體重并以游標卡尺(每兩天)測量移植瘤的最長徑及最短徑,繪制腫瘤生長曲線,計算腫瘤體積=腫瘤最長徑×腫瘤最短徑2/2。用藥4周后,處死裸鼠,取瘤體,常規(guī)HE染色觀察移植瘤光鏡下改變,并取裸鼠主要內(nèi)臟行HE染色,觀察NIM對裸鼠可能的毒副作用。利用免疫組織化學技術檢測COX-2、Survivin和PCNA蛋白表達,顯微鏡下觀察移植瘤細胞中COX

4、-2、Survivin和PCNA蛋白表達情況,并采用圖像分析系統(tǒng)作平均光密度值測定。同時采用逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈反應法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測 COX-2、Survivin和PCNA mRNA表達,Biod-rad軟件分析對照組與試驗組COX-2、Survivin和PCNA mRNA灰度值。
　　 結果:(1)成功構建出人喉鱗癌裸鼠移植瘤模型

5、,兩組裸鼠均有喉鱗癌原位移植瘤生長,成瘤率100％；其瘤組織經(jīng)病理切片檢查證實為喉鱗癌,且在實驗期內(nèi),2組動物全部存活。(2)2組裸鼠飲食正常,活動自如,精神狀態(tài)良好,無1只死亡；其心、肝、脾、肺、腎的重量和組織形態(tài)觀察無明顯差異,解剖消化道,未發(fā)現(xiàn)出血病灶。(3)NIM治療組裸鼠移植瘤體積為(172.67+115.25)mm3,較對照組(478.69±341.84)mm3明顯減小,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；NIM治療組裸

6、鼠體重為(23.22±1.78)g,對照組為(24.05±1.79)g,兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；NIM治療組裸鼠移植瘤重量(0.40±0.33)g,較對照組(0.83±0.27)g明顯減小,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),計算抑瘤率為51.81％。(4)免疫組織化學SP法檢測裸鼠移植瘤組織中COX-2、Survivin、PCNA蛋白表達,MM治療組COX-2蛋白表達光密度為(38.12±15.56),與對照組(1

7、40.92±23.12)比較顯著下降,經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；NIM治療組Survivin蛋白表達為(46.79±10.04),經(jīng)統(tǒng)計學分析與對照組(133.41±20.01)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；NIM治療組PCNA蛋白表達顯著下降(62.97±13.83),經(jīng)統(tǒng)計學分析與對照組(110.23±13.00)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(5)RT-PCR檢測COX-2 mRNA表達MM治療

8、組灰度值為(0.70±0.18),對照組為(2.23±0.38),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；NIM治療組Survivin mRNA表達為(0.34±0.04),對照組為(1.85±0.18),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；NIM治療組PCNA mRNA表達為(0.45±0.05),對照組為(1.91±0.70),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論:(1)選擇性COX-2

9、抑制劑NIM對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤生長有明顯抑制作用。(2)NIM可抑制COX-2蛋白及mRNA表達,推測NIM可通過依賴COX-2表達的方式抑制腫瘤生長。(3)NIM可在蛋白及mRNA水平抑制喉鱗癌細胞增殖、促進細胞凋亡,其機制可能與抑制COX-2、Survivin及PCNA表達有關。(4)NIM無明顯毒副作用。(5)選擇性COX-2抑制劑有望成為未來喉鱗癌綜合治療的一部分,它的研制開發(fā)可能為喉鱗癌預防和治療提供全新的廣闊前