玉米花粉多糖對大鼠腸絨毛微血管內(nèi)皮細(xì)胞幾種免疫相關(guān)因子的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩50頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、本試驗(yàn)?zāi)康刂荚谔接懹衩谆ǚ鄱嗵?PAM)的免疫增強(qiáng)作用機(jī)制,同時借此探討機(jī)體免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的基本工作模式?;痉椒ㄊ潜O(jiān)測大鼠腸絨毛微血管內(nèi)皮細(xì)胞(REC)培養(yǎng)物中受一定濃度的PAM刺激后分泌免疫相關(guān)因子NO、IL-6、ET-1的濃度變化。首先提取PAM并進(jìn)行純化和含量測定。參考植物多糖提取的一般工藝進(jìn)行改進(jìn),直接使用乙醇回流,然后再使用水提醇沉法。最后通過葡聚糖凝膠柱純化,收集Molish反應(yīng)陽性部分干燥備用。其次培養(yǎng)REC并進(jìn)行純化,用

2、間接免疫熒光法等鑒定均顯示陽性,由此確認(rèn)得到內(nèi)皮細(xì)胞。參考哺乳動物正常血糖水平,設(shè)計(jì)PAM原始工作濃度為100μg/ml,約為正常血糖水平的600~1000分之一,實(shí)際作用濃度在4~8μg/ml。當(dāng)細(xì)胞層生長達(dá)80﹪時,消化并且收獲細(xì)胞,做細(xì)胞計(jì)數(shù),稀釋到1×105/ml備用。取新細(xì)胞培養(yǎng)板,按照每孔0.5ml進(jìn)行接種,繼續(xù)培養(yǎng)。將預(yù)先升至室溫的PAM溶液按照20μl的設(shè)計(jì)加入到各組細(xì)胞培養(yǎng)孔中。按照設(shè)計(jì)時間取樣,經(jīng)過3000rpm×5

3、min離心,收取上清液冷凍存放備檢。對樣品中的一氧化氮采用硝酸還原酶法檢測。結(jié)果試驗(yàn)組中的NO含量在可觀察到的7小時以內(nèi)均明顯高于對照組,而且呈現(xiàn)劑量依賴性,但隨時間延長,NO含量有逐漸下降的趨勢。表明PAM的刺激導(dǎo)致REC分泌NO突然增加,然后逐漸減少;即PAM對REC的作用之一是導(dǎo)致REC分泌NO含量顯著增加。對樣品中的IL-6采用試劑盒ELISA法測定。試驗(yàn)組仍然明顯高于對照組,且呈現(xiàn)相同的變化規(guī)律。對樣品中ET-1采用試劑盒EL

4、ISA法測定。從第48小時后試驗(yàn)組均比對照組高,隨時間延長呈明顯上升趨勢。綜合分析試驗(yàn)結(jié)果,PAM刺激初期,REC呈爆發(fā)式分泌大量NO后逐漸減少NO分泌量;然后分泌較多的IL-6;在持續(xù)大約48小時左右,開始增加分泌ET-1并逐漸加強(qiáng)。從這些細(xì)胞因子的生理作用分析,受PAM刺激后,首先表現(xiàn)為血管壁的擴(kuò)張,細(xì)胞間隙加大,促進(jìn)炎性反應(yīng)發(fā)生;然后表現(xiàn)為血管壁的收縮,控制漏出液,減輕炎性反應(yīng)程度,即具有免疫增強(qiáng)作用的PAM接觸到REC時會使RE

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論