自然流產(chǎn)CTB與EVT的基因表達譜分析.pdf

1、目的：滋養(yǎng)層細胞對子宮蛻膜的有控性侵襲是胚胎著床和早期發(fā)育過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，這一環(huán)節(jié)的順利完成依賴于各種基因表達的精確調(diào)控。本研究借助基因芯片技術(shù)，分析自然流產(chǎn)胚胎的CTB和EVT基因表達譜，篩選二者差異表達基因，并結(jié)合代謝通路分析，探討異常妊娠EVT侵襲的分子基礎(chǔ)，為闡明自然流產(chǎn)的發(fā)病原因及其基因網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制提供實驗依據(jù)。 方法： 1)收集妊娠8～12周自然流產(chǎn)的胚胎絨毛和子宮蛻膜組織，胰酶消化法獲得CTB和EVT

2、。 2)提取流產(chǎn)CTB和EVT的總RNA，檢測RNA純度和完整性。 3)RNA送上海生物芯片公司建立基因表達譜芯片，獲得基因表達譜數(shù)據(jù)。 4)分析數(shù)據(jù)，獲取差異表達基因。 5)選取兩個差異表達基因KISS1和MMP10，用RT-PCR和免疫組化法驗證芯片結(jié)果可靠性。 6)結(jié)合代謝通路分析差異表達基因的生物學功能，并對基因進行分類檢索。 結(jié)果： 1)RNA純度及完整性分析，A260.

3、280達到1.9～2.1，28SRNA和18SRNA電泳條帶清晰，亮度之比約為2:1，表明所抽提的RNA達到實驗要求。 2)采用不同濃度胰蛋白酶消化方法，獲得了高純度的CTB和EVT。 3)建立了流產(chǎn)CTB和EVT的基因表達譜芯片，質(zhì)控合格。RT-PCR驗證KISS1和MMP10表達與芯片結(jié)果一致，證實芯片結(jié)果可靠。 4)在CTB和EVT基因表達譜芯片中，共篩選到2308個差異表達基因(或EST)，聚類分析結(jié)果顯

4、示上調(diào)基因933個，下調(diào)基因1375個。所有差異表達基因按GeneOntoloty功能分類標準進行了功能檢索分類。 5)綜合分析不同生物學功能類別的2308個差異表達基因，共檢索到代謝相關(guān)基因上調(diào)307個、下調(diào)391個；細胞外基質(zhì)相關(guān)基因上調(diào)29個、下調(diào)5個；信號轉(zhuǎn)導相關(guān)基因上調(diào)54個、下調(diào)153個；轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)基因上調(diào)87個、下調(diào)58個；細胞生長相關(guān)基因上調(diào)36個、下調(diào)78個；凋亡相關(guān)基因上調(diào)13個、下調(diào)41個；物質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)基

5、因上調(diào)62個、下調(diào)80個；應激反應相關(guān)基因上調(diào)30個、下調(diào)53個；免疫應答相關(guān)基因上調(diào)12個、下調(diào)112個；細胞黏附相關(guān)基因上調(diào)37個、下調(diào)53個；發(fā)育相關(guān)基因上調(diào)58個、下調(diào)55個。此外，通過檢索，我們發(fā)現(xiàn)有539個基因尚無功能描述，其中上調(diào)209個、下調(diào)296個。 結(jié)論： 建立了流產(chǎn)CTB和流產(chǎn)EVT的全基因組表達譜芯片，并獲取差異表達基因2308個，其中一些是目前還沒有報道生物學功能或在胚胎發(fā)育中無相關(guān)報道的新基因

6、，同時印證了當前已經(jīng)報道和自然流產(chǎn)發(fā)生相關(guān)的基因。 綜合分析不同生物學功能類別的差異表達基因表達變化，提示可能存在以下一些調(diào)節(jié)機制：與正常妊娠相比，在自然流產(chǎn)中，細胞黏附和細胞外基質(zhì)相關(guān)基因表達下調(diào)，如MMP-1、MMP-2、MMP-9，MMP-10等基因下調(diào)明顯，表明在自然流產(chǎn)中這些基因所涉及的EVT識別、黏附、降解細胞外基質(zhì)，侵入血管內(nèi)皮使母體血管重建等功能都呈降低的趨勢；在自然流產(chǎn)蛻膜中，免疫應答和細胞防御反應相關(guān)基因表達

7、下調(diào)，可能導致免疫細胞對滋養(yǎng)層細胞特異性識別而引起殺傷活性增高，使得母體免疫系統(tǒng)對胚胎產(chǎn)生排斥，這可能是引發(fā)自然流產(chǎn)的又一重要因素；眾多信號轉(zhuǎn)導通路和細胞周期調(diào)控相關(guān)基因發(fā)生改變，總體趨勢還是促使細胞向增殖期轉(zhuǎn)變，發(fā)生增殖和分化，有序地形成功能不同的組織和系統(tǒng)，以維持胎兒的早期發(fā)育；細胞生長/維持和發(fā)育相關(guān)基因表達旺盛，是適應胚胎細胞的生長發(fā)育和各系統(tǒng)器官形成的需要；與正常妊娠基因表達譜相比較，自然流產(chǎn)的基因芯片中物質(zhì)轉(zhuǎn)運和代謝相關(guān)的上