ATP synthaseα抑制Aβ神經(jīng)毒性損傷的機制研究.pdf

1、J口博士學位論文A T P s y n t h a s e 旺抑制A p 神經(jīng)毒性損傷的機制研究博士研究生： 孫小波專導苣業(yè)：神經(jīng)生物學師：朱粹青副教授位： 復旦大學上海醫(yī)學院神經(jīng)生物學系醫(yī)學神經(jīng)生物學國家重點實驗室二O 一一年四月卜二_ ．k ■廠呈蘭查蘭塑主堡蘭! ! 型! 坐豎! 型型業(yè)塑絲墨絲塑垡些! ! 型墮鎏縮略語表中文摘要前言● 第一部分A T P 臺酶q 弧單位抑制A B 介導的細胞毒性作用口口材料與方法1 材料兇種與質(zhì)

2、粒2 主要藥品及試劑 ．．．3 引物臺成與D N A 序列測定4 主要儀器5 有關溶液的配制2 方法 1 62 I 質(zhì)粒構(gòu)建 1 62 ．2 堪受態(tài)太腸桿菌的轉(zhuǎn)化 1 92 ．3 挑斑，測序．．2 ．4 質(zhì)粒D N A 的抽提2 ．5 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 2 02 ．6 流式細胞儀分選 2 02 7S H ．S Y 5 Y 細胞的培養(yǎng) 2 02 ．8 細胞活力檢測．． 22 ．9 A 1 3 孵育人神經(jīng)母細胞瘤細胞 22 1 0 細胞免疫組化

3、?? 22 1 l 線托體膜電何的測定 2 22 1 2 H o e c h s t 船色 2 22 1 3 考馬斯亮藍法蛋白定量 2 32 1 4 W e s t e r nB l o t 免艘印跡．． 2 32 I 5 統(tǒng)計分析 2 3實驗結(jié)果 ? ??? 2 53 l A 8 對人神經(jīng)母細胞瘤細胞的毒性作用 ?? 2 53 ．2 纖維狀A B 引起的P a x i l l i n 和F a k 的應激性反應 2 53 ．3 纖維狀

4、A p 引起的c ．F O S 和A l P 合酶a 弧單位持續(xù)性增加 2 63 ．4 A T Ps y n 構(gòu)建和鑒定．． 2 73 ．5 轉(zhuǎn)染細胞的形態(tài)學鑒定 2 83 , 6 A T P 臺酶n 亞單位與A P P 共定位 3 037 A T P 合酶a 旺單位和線粒體外膜特異性蛋白T O M 麩定位 3 13 ．8 A T P 臺酶Ⅱ弧單位利線粒體內(nèi)膜特異性蛋向T I M 批定位 3 23 ．9 A T P 臺酶q 難單位過表選