臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療終末期肝硬化的臨床觀(guān)察.pdf

1、肝硬化(hepatic cirrhosis)是由多種原因引起的肝臟損害，表現(xiàn)為肝細(xì)胞變性壞死，纖維組織增生，肝細(xì)胞結(jié)節(jié)狀再生，肝小葉結(jié)構(gòu)變形，血液循環(huán)途徑被改建，最終導(dǎo)致肝硬化。根據(jù)病因分類(lèi)，肝硬化主要有病毒性肝硬化、酒精性肝硬化、膽汁性肝硬化、自身免疫性肝硬化及隱原性肝硬化等。我國(guó)以病毒性肝硬化為主，其中主要為乙型肝炎病毒感染造成，很多病人無(wú)法長(zhǎng)期規(guī)范化治療最終致肝硬化。肝硬化病人有門(mén)脈高壓和肝功能障礙，病人常因消化道大出血和肝性腦病

2、死亡。因此，肝硬化治療是一項(xiàng)長(zhǎng)期艱巨的任務(wù)，有效的方法為肝移植，因肝臟供體少，臨床工作難以大量展開(kāi)，越來(lái)越多的研究者致力于研究能替代肝移植的方法，間充質(zhì)干細(xì)胞成為新的方向。
　　 間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)屬于干細(xì)胞家族，主要存在于骨髓、臍帶、臍血和胚胎中。因具有多向分化潛能、造血支持、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)，受到人們的關(guān)注。間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)或體外誘導(dǎo)條件下可以分化為骨、軟骨、脂肪

3、、肌肉、肌腱、神經(jīng)、類(lèi)肝細(xì)胞、心肌等組織細(xì)胞，連續(xù)傳代后仍具有多向分化潛能，可作為理想種子細(xì)胞用于炎癥病變及衰老引起的器官修復(fù)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用于臨床較早，但抽取骨髓為有創(chuàng)性檢查，增加了病人痛苦，越來(lái)越多的學(xué)者致力于研究臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源廣泛，收集臍帶為無(wú)創(chuàng)操作，且治療肝硬化有促進(jìn)肝臟再生、提高患者生活質(zhì)量的作用，在臨床上應(yīng)用越來(lái)越受到重視。
　　 目的：制備足月順產(chǎn)胎兒臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，探討

4、體外分離、培養(yǎng)、鑒定方法，觀(guān)察臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療終末期肝硬化的臨床療效。
　　 方法：無(wú)菌條件下采集新生兒臍帶，經(jīng)過(guò)分離，培養(yǎng)獲得間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀表面抗原測(cè)定（CD29、CD105、CD34、CD45）；選擇50例肝硬化患者,26例患者在內(nèi)科治療基礎(chǔ)上經(jīng)前臂靜脈或肝動(dòng)脈插管進(jìn)行MSCs移植，術(shù)后定期檢測(cè)肝功能、凝血功能及臨床癥狀，并觀(guān)察同期的癥狀體征和不良反應(yīng)，同時(shí)隨機(jī)選擇24例僅以?xún)?nèi)科治療的肝硬化患者做為對(duì)照組，兩組

5、間進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：(1)培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、旋渦狀生長(zhǎng)。P1代消化后傳代，貼壁時(shí)間約48h左右,2-3W長(zhǎng)滿(mǎn)80％。P6代以?xún)?nèi)的細(xì)胞增殖無(wú)明顯差異。P3-P6代生長(zhǎng)速度較快,24h貼壁,48h長(zhǎng)滿(mǎn)70％,72h長(zhǎng)滿(mǎn)80％,P3-P6代內(nèi)無(wú)明顯分化。
　　 (2)細(xì)胞免疫表型顯示表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的特異性標(biāo)記CD29；但不表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)記CD34、CD45。這與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表型一致。
　

6、　 (3)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植后，治療組ALB、PA和Fbg 水平比對(duì)照組明顯升高(P﹤0.05),PT 時(shí)間與對(duì)照組相比明顯降低(P﹤0.05)。
　　 (4)治療組患者從治療后1周開(kāi)始，乏力、腹脹、納差明顯好轉(zhuǎn)，12周后患者腹水明顯減少。26例移植患者術(shù)中未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，無(wú)與移植相關(guān)的嚴(yán)重并發(fā)癥。
　　 結(jié)論：
　　 (1)本實(shí)驗(yàn)用雙酶消化法分離出間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)過(guò)凍存、復(fù)蘇后細(xì)胞損傷小，多次傳代后細(xì)胞