聚肌胞(poly i-c)誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：聚肌苷酸(聚)胞苷酸(簡(jiǎn)稱聚肌胞,polyinosinic-polycytidylic acid,poly i:c)是一種人工合成的雙鏈RNA(double-strand RNA,dsRNA)模擬物。本研究利用肺癌細(xì)胞系來(lái)探討poly i:c誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。
　　 方法：將poly i:c轉(zhuǎn)入肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞及小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H446細(xì)胞中,MTT法檢測(cè)poly i:c對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用。A

2、nnexinV FITC／PI雙染檢測(cè)poly i:c對(duì)A549及NCI—H446細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。Real-time PCR方法檢測(cè)poly i:c對(duì)肺癌細(xì)胞中受體TLR3,MDA-5及RIG-Ⅰ mRNA表達(dá)的影響,并檢測(cè)poly i:c對(duì)IFN-β mRNA表達(dá)的影響。蛋白免疫印跡法檢測(cè)poly i:c作用于A549細(xì)胞后凋亡蛋白CaspaSe-3、Bcl-2及Bax的變化,并檢測(cè)磷酸化JNK和ERKMAPK蛋白的表達(dá)。

3、　　 結(jié)果：MTT結(jié)果提示:poly i:c胞內(nèi)作用明顯抑制肺癌細(xì)胞A549和NCI-H446的生長(zhǎng),這種抑制作用具有劑量及時(shí)間依賴性。AnnexinV FITC／PI雙染結(jié)果提示:與對(duì)照組(PBS組,poly i:c單獨(dú)作用組,轉(zhuǎn)染試劑Hipo單獨(dú)作用組)比較,poly i:c胞內(nèi)作用可顯著地誘導(dǎo)A549和NCI-H446細(xì)胞凋亡(p<0.05)。Real-time PCR結(jié)果提示:poly i:c胞內(nèi)作用6h可明顯上調(diào)A549和N

4、CI-H446細(xì)胞的TLR3、RLG—Ⅰ、MDA-5及IFN-β mRNA的表達(dá),與對(duì)照組比較均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。蛋白免疫印跡法結(jié)果發(fā)現(xiàn):在A549細(xì)胞中,poly i:c胞內(nèi)刺激可以激活Caspase-3和JNK MAPK通路,同時(shí)抑制ERK MAPK通路。
　　 結(jié)論：poly i:c胞內(nèi)作用可以明顯抑制肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡。poly i:c胞內(nèi)作用可上調(diào)肺癌細(xì)胞中TLR3,RIG-Ⅰ,MDA-