熱休克蛋白70-多肽復(fù)合物的純化及其負(fù)載樹突狀細(xì)胞抗小鼠結(jié)腸癌作用的研究.pdf

1、V 1 1 1 0 9 0 9 6分類號：R 7 3 03 學(xué)校代碼：學(xué) 號：1 0 3 9 22 0 0 4 3 1 4福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文熱休克蛋白7 0 ．多肽復(fù)合物的純化及其負(fù)載樹突狀細(xì)胞抗小鼠結(jié)腸癌作用的研究P u r i f i c a t i o no f H S P 7 0 一p o l y p e p t i d ec o m p l e x e s a n dt r e a t m e n to f e s

2、 t a b l i s h e dc o l o n c a r c i n o m a —b e a r i n gm i c eb y d e n d r i t i cc e l l sp l u s e d w i t hH S P 7 0 - P C s所在院( 系) ：研 究生：學(xué)科( 專業(yè)) ：導(dǎo) 師：研究起止目期；福建省腫瘤醫(yī)院劉勝腫瘤學(xué)應(yīng)敏剛 教 授鄭秋紅 主任醫(yī)師二o O 六年二月至二o o 七年三月二0 0 七年

3、三月熱休克蛋白7 0 ．多肽復(fù)合物的純化及其負(fù)載樹突狀細(xì)胞抗小鼠結(jié)腸癌作用的研究中文摘要目的：應(yīng)用快速蛋白液相色譜( f a s t p r o t e i n l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ，F(xiàn) P L C ) 系統(tǒng)，建立分離和純化熱休克蛋白7 0 ．多肽復(fù)合物( h e a t s h o c kp r o t e i n7 0 - p o l y p e p t i d cc o

4、m p l e x e s ，H S P 7 0 ．P C s ) 的方法，并觀察其負(fù)載樹突狀細(xì)胞( d e n d r i t i c c e l l ，D C )的抗腫瘤免疫保護(hù)效應(yīng)。方法：采用D E A E ．S c p h a r o s c 離子交換層析和A D P ．A g a r o s e 親和層析，從熱處理的B A L B ／c 鼠源性結(jié)腸癌細(xì)胞( C T 2 6 ) 裂解液中分離、純化H S P 7 0 一P C s

5、 。所得蛋白經(jīng)不連續(xù)S D S ．聚丙烯酰胺電泳及W e s t e r n ．b l o t t i n g 進(jìn)行蛋白分子量及性質(zhì)鑒定，B r a d f o r d 法測定蛋白的得率。用提純的H S P 7 0 ．P C s 負(fù)載B A L B ／c 小鼠骨髓來源的D C ，觀察D C 誘導(dǎo)的腫瘤特異性細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞( c y t o t o x i cT l y m p h o c y t e ，C T L ) 對腫瘤細(xì)胞的

6、殺傷活性：并將D C 接種于荷瘤小鼠皮下，觀察其對腫瘤生長的抑制作用及對荷瘤小鼠生存期的影響。結(jié)果；純化蛋白經(jīng)鑒定為分子量7 0 K D 的H S P 7 0 - P C s ；平均l 克濕重腫瘤細(xì)胞獲得6 3 ．6 3p g 的H S P 7 0 ．P C s ；H S P 7 0 ．P C s 負(fù)載D C 誘導(dǎo)的C T L 對C T 2 6 腫瘤細(xì)胞具有特異性殺傷作用；用其進(jìn)行治療能明顯抑制小鼠腫瘤的生長，并能顯著延長荷瘤小鼠的生存