轉(zhuǎn)染PCNA多肽表位融合IL-18基因的樹(shù)突狀細(xì)胞刺激T細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：研究轉(zhuǎn)染增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)肽表位融合白介素18(IL-18)基因的樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)刺激T淋巴細(xì)胞后對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：采用密度梯度離心法分離獲取人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，分離培養(yǎng)人樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cells，DCs)和T淋巴細(xì)胞，運(yùn)用流式細(xì)胞儀測(cè)定未成熟DC的CD40及成熟DC的CD83。通過(guò)非脂質(zhì)體聚合物MegaTran1.0分別將帶有熒光標(biāo)記的空質(zhì)粒(pIRES-EGFP

2、)，PCNA肽表位質(zhì)粒(pIRES-EGFP-PCNA(6))和PCNA肽表位融合IL-18基因質(zhì)粒(pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18)轉(zhuǎn)染到DCs內(nèi)。通過(guò)熒光情況鑒定轉(zhuǎn)染效率。根據(jù)本課題既往試驗(yàn)結(jié)果，三組按照DCs：T淋巴細(xì)胞1:10的比例與T淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)，并設(shè)置空白對(duì)照組。選用T淋巴細(xì)胞與結(jié)腸癌細(xì)胞濃度比為5:1，10:1，20:1，40:1四個(gè)濃度梯度，取共培養(yǎng)后的上清液與結(jié)腸癌細(xì)胞共培養(yǎng)。采用流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)

3、腸癌細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)果：人PBMC可以成功誘導(dǎo)出DC，流式細(xì)胞儀顯示人DC高表達(dá)CD40(72％)，成熟DC較高表達(dá)CD83(75％)。MegaTran1.0能較好的將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至未成熟的DCs內(nèi)。各組DCs刺激T淋巴細(xì)胞后均能誘導(dǎo)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的凋亡。在相同T淋巴細(xì)胞與結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的濃度比下，轉(zhuǎn)染pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18的DCs刺激T細(xì)胞后的上清液對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的凋亡最明顯。優(yōu)于對(duì)

4、照組、空載體組和pIRES-EGFP-PCNA(6)組。PCNA肽表位基因轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照DCs組、空質(zhì)粒組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，空白對(duì)照組與空質(zhì)粒組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。且各組內(nèi)，隨著濃度比的增加，結(jié)腸癌SW620細(xì)胞凋亡越明顯。
　　結(jié)論：轉(zhuǎn)染pIRES-EGFP-PcNA(6)/IL-18的DCs刺激T淋巴細(xì)胞后的上清液對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的凋亡作用最強(qiáng)。T淋巴細(xì)胞與結(jié)腸癌細(xì)胞效靶比濃度越高，