激動Toll樣受體的樹突狀細胞腫瘤疫苗對小鼠結(jié)腸癌殺傷作用的實驗研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是我國常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年上升。手術仍是最有效的治療手段。放療和化療等治療模式尚缺乏特異性。腫瘤的生物免疫治療被認為是繼手術、放療、化療之后對腫瘤具有一定效果的又一治療方法。以樹突細胞(dendriticcells，DC)腫瘤疫苗為代表的免疫療法對腫瘤有特異性殺傷作用，具有較高的安全性和準確性，有可能成為治療腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移的有效方法。
　　腫瘤組織表達一些自身免疫可以識別的變異或獨特的抗原，這是腫痛免疫治療的基

2、礎。DC是一組由骨髓來源、分布廣泛、具有遷移能力的免疫細胞，是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強大的抗原遞呈細胞(Antigenpresentingcells，APCs)。DC作為一種專職的抗原呈遞細胞，能攝取和加工抗原，激發(fā)T細胞免疫，在腫瘤細胞免疫中起著十分重要的作用。負載腫瘤抗原的DC具有疫苗的功能，故稱之為樹突細胞疫苗。由于DC疫苗有較高的抗原遞呈效率，正成為新一代疫苗的代表。
　　目前，有少量DC腫瘤疫苗應用于臨床，但效果尚不令人滿意，

3、主要原因在于體外培養(yǎng)的DC未能達到理想成熟狀態(tài)，無法刺激機體產(chǎn)生有效的特異性抗腫瘤免疫反應。
　　Toll樣受體(Toll-likereceptors，TLRs)是近來發(fā)現(xiàn)的一類重要的模式識別受體(patternrecognitionreceptors，PRRs)，通過識別病原體相關分子結(jié)構(gòu)(pathogen-associatedmolecuIarpatterns，PAMPs)發(fā)揮宿主抗感染作用，在機體天然免疫中起著重要的作用，同

4、時也是連接固有免疫和獲得性免疫的橋梁。目前己發(fā)現(xiàn)DC存在多種TLRs，它們作為重要的模式識別受體(PAMPs)，在天然免疫系統(tǒng)中能偵察識別外來的抗原、刺激DC成熟進而誘導獲得性免疫反應。
　　目的：
　　比較TLRs聯(lián)合激活的DC跟常規(guī)DC功能上的區(qū)別：在體外通過LDH釋放法比較兩組DC誘導的特異性細胞毒性T淋巴細胞(CytotoxcTlymphocyte，CTL)對腫瘤細胞的殺傷作用；并且建立小鼠腸癌模型，比較不同DC疫苗

5、對小鼠腫瘤的抑制作用并記錄小鼠的生存時間。
　　方法：
　　1.取6-8周齡的C57BL/6轉(zhuǎn)入CEA基因小鼠，在體外分別常規(guī)培養(yǎng)DC和用TLR配體聯(lián)合刺激DC。在培養(yǎng)的第六天取細胞上清液，比較兩組DC中IL-12p70的分泌水平。
　　2.對體外培養(yǎng)的DC荷載小鼠MHCⅠ類分子限制性表位CEA526-533，與小鼠脾臟細胞共培養(yǎng)后作為效應細胞(Effectorcell，E)，分別以兩種小鼠腸癌細胞(MC38，MC38

6、-CEA)作為靶細胞(Targetcell，T)，在體外進行細胞毒實驗，比較各組效應細胞對腫瘤細胞的殺傷作用。
　　3.建立小鼠腸癌模型，觀察不同DC疫苗對小鼠腸痛的抑制作用。每劇兩次測量各組小鼠腫瘤的最大徑及最小徑，并記錄小鼠的生存時間，最后計算備組腫瘤平均體積，繪制各組腫瘤組織生長曲線和小鼠生存曲線。
　　結(jié)果：
　　1.聯(lián)合TLR組DC的IL-12分泌量顯著高于常規(guī)組DC(P<0.01)。
　　2.與聯(lián)合T

7、LR組DC共培養(yǎng)后獲得的效應細胞對MC38-CEA腸癌細胞在較高效應細胞：靶細胞(E：T)比值時具有一定的殺傷作用，顯著優(yōu)于常規(guī)組(P<0.05)。
　　3.對于MC38細胞，與聯(lián)合TLR組以及常規(guī)組DC共培養(yǎng)的效應細胞均無明顯殺傷效應，兩組無明顯差異(P>0.05)。
　　4.MC38-CEA腸癌紐胞建立的小鼠腫瘤模型中，TLR激活并且荷載CEA肽段的DC疫苗組的小鼠腫瘤平均體積明顯小于其余各組(P<0.01)，并且存活期

8、明顯優(yōu)于其余各組(P<0.01)。
　　5.MC38腸癌細胞建立的小鼠腫瘤模型中，各組腫瘤平均體積無明顯差差(P>0.05)，且各組小鼠存活期無明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.聯(lián)合激動TLR的DC腫瘤疫苗，體外試驗中對MC38-CEA小鼠腸癌細胞株具有一定殺傷作用且是CEA特異性的，而常規(guī)DC疫苗無明顯殺傷作用。
　　2.聯(lián)合激動TLR并且荷載CEA肽段的DC疫苗能顯著抑制MC38-CEA腸癌細胞