IL-23-Th17細(xì)胞在EAE中作用的探討.pdf

1、目的：建立慢性-非緩解性EAE的小鼠模型，運(yùn)用ELISA、RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)等方法在mRNA和蛋白水平檢測(cè)IL-23/Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子IL-17在小鼠腦及脾組織中不同時(shí)期的表達(dá)情況，以探討IL-23/Th17在多發(fā)性硬化（MS）中發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制。
　　方法：將45只8到12周清潔級(jí)健康雌性C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為佐劑對(duì)照組（n=21只）和EAE組（n=24只）。EAE組中根據(jù)疾病的發(fā)展階段又分為發(fā)病初期、發(fā)病高

2、峰期、慢性期組。EAE組用完全弗氏佐劑和人工合成的MOG35-55混合后免疫C57BL/6小鼠，佐劑對(duì)照組用等量的PBS代替MOG35-55，按照Bensen評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)各組各時(shí)期小鼠的外周血IL-23、IL-17的分泌水平、流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞Th17細(xì)胞數(shù)量、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠腦組織中IL-23P19亞基的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠模型EAE組小鼠發(fā)病率

3、為75％（18/24）,最高臨床評(píng)分5分；佐劑對(duì)照組均無(wú)發(fā)病跡象，臨床評(píng)分0。
　　2.ELISA EAE組小鼠外周血IL-17含量與佐劑對(duì)照組比較，有顯著性差異(P<0.05)，各期均升高，其中高峰期升高明顯（P<0.05），慢性期有所下降，但與高峰期相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），佐劑對(duì)照組小鼠各期之間無(wú)差異（P>0.05）。IL-23含量各佐劑對(duì)照組之間無(wú)差異（P>0.05），EAE組較對(duì)照組顯著升高，其中發(fā)病初期升高最明

4、顯（P<0.05）。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞中Th17細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比例佐劑對(duì)照組各期均呈低表達(dá)，各期之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），EAE組較對(duì)照組表達(dá)上調(diào)，高峰期升高最明（P<0.05）。
　　4.實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示 EAE組腦組織中 IL-23P19含量較佐劑對(duì)照組明顯升高（P<0.05），其中發(fā)病初期表達(dá)量最高，高峰期表達(dá)有所下降（兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05），慢性期表達(dá)下降