Th17細(xì)胞在重癥肌無(wú)力發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、重癥肌無(wú)力( myasthenia gravis，MG)和它的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力(experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG)均為自身抗體介導(dǎo)的神經(jīng)肌肉接頭( neuromuscular junction，NMJ)疾病，NMJ突觸后膜煙堿型乙酰膽堿受體( acetylcholine receptor，AChR)是大多數(shù)病人自身抗體攻擊的主要靶點(diǎn)。MG和EAMG的這些抗體的

2、產(chǎn)生依賴于輔助T細(xì)胞( helper T cell，Th)和它們產(chǎn)生的細(xì)胞因子。Th17為一種新定義的Th類細(xì)胞，與自身免疫性疾病關(guān)系密切，為了明確Th17細(xì)胞在MG中的作用，本研究以EAMG模型和病人胸腺瘤組織為研究對(duì)象，采用免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，研究Th17細(xì)胞在MG發(fā)病中的作用，結(jié)果顯示：自身反應(yīng)性Th17細(xì)胞具有驅(qū)使EAMG致病性抗體產(chǎn)生的作用，并且MG病人的胸腺瘤組織高表達(dá)IL-17。本研究提示Th17細(xì)胞是導(dǎo)致MG的關(guān)鍵因

3、素，可以作為免疫治療的新靶點(diǎn)。
　　 初始T細(xì)胞分化成Th亞群需要固有免疫和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)相互作用，因此本研究首先探討了單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractantprotein1，MCP-1，也稱CC chemokine ligand2，CCL2)在EAMG發(fā)病機(jī)制中的作用。CCL2在C57BL/6(B6)小鼠的脾和淋巴結(jié)表達(dá)增高，CCL2缺乏(CCL2--)小鼠抵抗EAMG誘導(dǎo)，CCL2-/-小鼠血

4、清抗AChR IgG、IgGl和IgG2a抗體水平與B6小鼠相似，但I(xiàn)gG2b水平明顯減少，提示IgG2b水平低下是CCL2-/-小鼠能抵抗EAMG誘導(dǎo)的原因。CCL2-，-小鼠B細(xì)胞在體外增殖、分化成漿細(xì)胞、產(chǎn)生IgG抗體和遷移到次級(jí)淋巴器官的功能均正常，分泌IFN-γ(Th1)和IL-4(Th2)的CD4+T細(xì)胞數(shù)量略少于B6鼠，但是分泌IL-17的CD4+T細(xì)胞即Th17細(xì)胞卻明顯少于B6鼠，表明CCL2-/-小鼠IgG2b水平的

5、低下與Th17細(xì)胞數(shù)量不足有關(guān)。因此CCL2在EAMG發(fā)病中的作用是驅(qū)使Th17細(xì)胞的發(fā)生，之后Th17細(xì)胞輔助B細(xì)胞產(chǎn)生致病性IgG2b抗體介導(dǎo)NMJ傳導(dǎo)功能阻滯，形成EAMG。
　　 繼之的研究表明缺乏CCL2導(dǎo)致產(chǎn)生IL-6的CDllb+單核細(xì)胞歸巢障礙，從而影響AChR反應(yīng)性Th17細(xì)胞的分化，揭示了CCL2驅(qū)使Th17發(fā)生的機(jī)制是通過(guò)聚集CDllb+細(xì)胞歸巢到次級(jí)淋巴器官產(chǎn)生IL-6來(lái)促使Th17細(xì)胞分化。IL-6缺乏

6、(IL-6-/-)小鼠抵抗EAMG的誘導(dǎo)緣于體內(nèi)Th17細(xì)胞分化障礙，說(shuō)明IL-6促使體內(nèi)Th17細(xì)胞的分化來(lái)介導(dǎo)EAMG發(fā)病。
　　 通過(guò)給EAMG小鼠直接注射IL-17進(jìn)一步探討Th17在MG發(fā)病機(jī)制中的作用。外源性IL-17可致B6小鼠EAMG特征加重并且抗AChR特異性IgG2b抗體水平明顯升高。給IFN-y缺乏(IFN-γ-/-)小鼠注射IL-17，可以誘導(dǎo)較嚴(yán)重的EAMG癥狀，說(shuō)明是IL-17而不是IFN-γ更影響E

7、AMG的形成，Th17細(xì)胞促進(jìn)EAMG形成的作用不依賴于Th1細(xì)胞。對(duì)AChR有免疫性的供體小鼠的Th17細(xì)胞可介導(dǎo)受體重組活化基因1(recombinant active gene1，RAGl)敲除(RAGl-/-)小鼠形成EAMG，IL-17缺乏(IL-17-/-)小鼠抵抗EAMG的誘導(dǎo)，進(jìn)一步顯示了Th17細(xì)胞在MG發(fā)病中的作用。
　　 為了檢驗(yàn)Th17細(xì)胞在胸腺瘤合并MG發(fā)病機(jī)制中的作用，對(duì)行胸腺切除手術(shù)的27例胸腺瘤患

8、者的相關(guān)資料進(jìn)行了回顧分析，并將切除的胸腺瘤組織蠟塊標(biāo)本切片用免疫組化方法確定MCP-1、IL-17、IL-6細(xì)胞因子及CDllb+和CD4+細(xì)胞在胸腺瘤組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示越年輕的男性胸腺瘤患者越容易伴發(fā)MG，B1和B2型為主的胸腺瘤合并MG的可能性較大，而C型(惡性腫瘤)合并MG的可能性極?。籌I型病理多表現(xiàn)為B1和B2型，越是良性的胸腺瘤越易發(fā)生MG，淋巴細(xì)胞型胸腺瘤易伴發(fā)MG；胸腺瘤合并MG的胸腺瘤組織高表達(dá)CCL2、IL

9、-6和IL-17細(xì)胞因子及CDllb+細(xì)胞和CD4+細(xì)胞。
　　 總之，本研究可以得出以下結(jié)論：在EAMG發(fā)病機(jī)制中CCL2介導(dǎo)CDllb+單核細(xì)胞歸巢次級(jí)淋巴器官，產(chǎn)生細(xì)胞源性的IL-6促進(jìn)自身反應(yīng)性Th17細(xì)胞分化，之后Th17細(xì)胞作用于B細(xì)胞產(chǎn)生能與補(bǔ)體結(jié)合的高致病性抗AChR IgG2b抗體，導(dǎo)致NMJ傳導(dǎo)障礙，形成EAMG。CCL2在調(diào)整產(chǎn)生IL-6的CDllb+細(xì)胞、Th17細(xì)胞和B細(xì)胞之間相互影響中起重要作用，這些