正己烷對(duì)血-神經(jīng)屏障通透性及神經(jīng)生長(zhǎng)因子與其受體影響的研究.pdf

1、職業(yè)性慢性正己烷中毒已經(jīng)成為我國(guó)當(dāng)前發(fā)病率最高的職業(yè)病之一。近期的臨床研究表明，NGF對(duì)于慢性正己烷中毒治療效果顯著，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明NGF能夠有效地改善慢性正己烷中毒的癥狀和體征。在本實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步研究了正己烷中毒性周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制并初步探討了外周血P0蛋白抗體作為慢性正己烷中毒性周圍神經(jīng)病生物標(biāo)志物的可能性。
　　 ⑴正己烷對(duì)血-神經(jīng)屏障通透性影響的研究。為了研究正己烷對(duì)血-神經(jīng)屏障通透性的影響，選用W

2、istar大鼠，用正已烷代謝產(chǎn)物2,5-HD建立中毒性周圍神經(jīng)病模型。模型建成后，麻醉動(dòng)物，經(jīng)左側(cè)股靜脈注入伊文蘭染料；充分循環(huán)后，大鼠固定、坐骨神經(jīng)包埋、切片，熒光顯微鏡下觀察紅色熒光在坐骨神經(jīng)的分布。結(jié)果顯示，中毒大鼠坐骨神經(jīng)血-神經(jīng)屏障通透性較對(duì)照組明顯升高，且坐骨神經(jīng)近端血-神經(jīng)屏障通透性升高較遠(yuǎn)端明顯。
　　 ⑵正己烷對(duì)周圍神經(jīng)NGF及其受體影響的研究。為了觀察2,5-HD對(duì)神經(jīng)元NGF、TrkA及p75NTR的影響，

3、采用免疫熒光技術(shù)分別觀察了不同2,5-HD染毒劑量(0mM、2.5mM、5.0mM、10.0mM和20.0mM)和10.0mM2,5-HD劑量下不同染毒時(shí)間(0h、1h、3h、6h、12h、24h和48h)VSC4.1運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元瘤細(xì)胞VSC4.1 NGF、TrkA和p75NTR表達(dá)水平的影響。結(jié)果顯示，隨著2,5-HD染毒劑量的增加，VSC4.1細(xì)胞NGF表達(dá)水平明顯升高，p75NTR則顯著降低；在10.0mM的染毒劑量下，隨著染毒時(shí)間

4、的延長(zhǎng)，NGF表達(dá)水平呈現(xiàn)明顯的先增高后降低的趨勢(shì)。為了觀察2,5-HD對(duì)雪旺細(xì)胞NGF和p75NTR的影響，采用免疫熒光技術(shù)分別觀察了不同2,5-HD染毒劑量(0mM、5.0mM、10.0mM、20.0mM和40.0mM)和10.0mM2,5-HD劑量下不同染毒時(shí)間(0h、1h、3h、6h、12h、24h和48h)，雪旺細(xì)胞NGF和p75NTR表達(dá)水平的改變。結(jié)果顯示，隨著2,5-HD染毒劑量的增加，雪旺細(xì)胞中NGF和p75NTR表達(dá)

5、水平均明顯升高；在10.0mM的染毒劑量下，隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，NGF和p75NTR表達(dá)水平均呈現(xiàn)明顯的先增高后降低的趨勢(shì)。為了觀察2,5-HD對(duì)坐骨神經(jīng)NGF、TrkA及p75NTR的影響，我們采用免疫組化和實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)了不同染毒時(shí)間(0天、7天、14天、21天和28天)Wistar大鼠坐骨神經(jīng)中NGF、TrkA和p75NTR及其mRNA的水平。結(jié)果顯示，隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠坐骨神經(jīng)中NGF水平未觀察到明顯改變，TrkA

6、水平呈現(xiàn)先降低后增高的趨勢(shì)，而p75NTR水平則明顯降低。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，坐骨神經(jīng)中NGF mRNA和TrkAmRNA水平均明顯增高，p75NTR mRNA水平則呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。
　　 ⑶正己烷對(duì)周圍神經(jīng)P0蛋白和血清P0蛋白抗體影響的研究。為了觀察2,5-HD對(duì)坐骨神經(jīng)中P0蛋白水平的影響和血清P0蛋白抗體的檢出率，我們采用免疫組化和ELISA方法，檢測(cè)了不同染毒時(shí)間大鼠坐骨神經(jīng)中P0蛋白水平和外周

7、血中P0蛋白抗體的檢出率；并使用職業(yè)流行病學(xué)現(xiàn)場(chǎng)資料，采用ELISA方法，檢測(cè)了職業(yè)性慢性正己烷中毒患者和正己烷暴露工人血清中P0蛋白抗體的水平。結(jié)果顯示隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠坐骨神經(jīng)中P0蛋白水平呈現(xiàn)明顯先降低后升高的趨勢(shì)；染毒28天，大鼠外周血中P0蛋白抗體檢出率較對(duì)照明顯升高。流行病學(xué)研究表明，慢性正己烷中毒性周圍神經(jīng)病患者和正己烷暴露工人血清P0蛋白抗體檢出率明顯高于對(duì)照人群。
　　 結(jié)論：(1)2,5-HD能夠破壞血