PDE5抑制劑對血腦腫瘤屏障通透性影響的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的
  建立小鼠淋巴瘤的原位腦腫瘤模型及血腦屏障(血腦腫瘤屏障)體外模型,研究PDE5抑制劑對腦部惡性腫瘤的化療療效影響,以及對血腦腫瘤屏障及正常血腦屏障通透性的影響,研究其分子機制,為提高腦部惡性腫瘤的化療療效提供新的方向和理論依據(jù)。
  方法
  體內(nèi)試驗:
  1、建立小鼠淋巴瘤的原位腦腫瘤模型
  2、通過小鼠腦惡性腫瘤模型評估PDE5抑制劑對血腦腫瘤屏障的開放作用(采用示蹤劑和檢測藥物濃度方法)

2、
  1)采用示蹤劑Evan’s Blue,比較PDE5抑制劑使用后,是否增加腦腫瘤中的濃度。
  2)采用氨甲喋呤藥物濃度檢測,比較PDE5抑制劑使用后,是否增加腦腫瘤中的濃度。
  3、電鏡下小鼠血腦屏障中的超微結(jié)構(gòu)改變
  體外實驗
  1、小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)
  2、Transwell系統(tǒng)共培養(yǎng)(腦微血管內(nèi)皮細胞和星形膠質(zhì)細胞)的血腦屏障體外實驗?zāi)P?br>  3、熒光標(biāo)記的利妥昔單抗(

3、FITC-Rituximab)通透性實驗
  熒光分光光度計法測定BMECs細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運的熒光標(biāo)記的利妥昔單抗(FITC-Rituximab)含量。
  臨床標(biāo)本:
  1、研究原發(fā)和轉(zhuǎn)移惡性腦腫瘤PDE5表達情況
  1)免疫組化法檢測PDE5表達。
  2)Western-Blot法檢測PDE5表達。
  結(jié)果
  1.免疫組化及病理顯示成功種植淋巴瘤,種植后小鼠體重變化情況及存活時間恒定有規(guī)

4、律,該方法建立的腦淋巴瘤動物模型在組織病理學(xué)上接近人腦淋巴瘤,且顱內(nèi)生長穩(wěn)定。成功率為80%。未見顱外轉(zhuǎn)移病灶,實驗周期短,重復(fù)性較好。
  2.依文思藍通透性檢測示:他達拉非組腦淋巴瘤血管通透性明顯增加(P<0.05)。氨甲喋呤在他達拉非組腦腫瘤組織中濃度增加近1.8倍(P<0.05),而非用藥腫瘤組織和正常組織中藥物濃度無差異。電鏡觀察:他達拉非組小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞內(nèi)有大量微囊液泡。
  3.原代星形膠質(zhì)細胞GFAP陽

5、性,CD34陰性,原代小鼠血管內(nèi)皮細胞CD34弱陽性,GFAP陰性。在腦微血管內(nèi)皮細胞對于熒光標(biāo)記利妥昔單抗的內(nèi)吞實驗中,給予他達拉非后,共培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞熒光量未有差異(p>0.05)。單獨培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞給予他達拉非后,熒光分光光度法測得熒光量增加1.4倍(P<0.05)。
  4.與正常腦組織標(biāo)本相比,PDE5在人腦惡性肘-瘤組織標(biāo)本中存在明顯高表達,并與腫瘤性質(zhì)相關(guān),結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。
  結(jié)論

6、
  1、外源性植入同源小鼠A20的B淋巴瘤,可在小鼠大腦中形成原位腫瘤,其形態(tài)及惡性程度符合腦淋巴瘤模型的要求,生長特性及病理特征與人腦淋巴瘤相似,可作為臨床淋巴瘤基礎(chǔ)研究的理想模型。
  2、5型磷酸二酯酶抑制劑可以特異性顯著增加小鼠腦淋巴瘤微血管的通透性,可能和微血管內(nèi)皮細胞內(nèi)微囊液泡數(shù)量增加有關(guān)。
  3、他達拉非可增加腦腫瘤血管內(nèi)皮細胞對大分子藥物的通透性,同時不增加正常血腦屏障的通透性。
  4、PD

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