S100A13基因高表達對甲狀腺癌TT細胞生長特性的影響.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定高表達S100A13基因的甲狀腺癌TT細胞系，觀察轉(zhuǎn)染S100A13基因后甲狀腺癌TT細胞的生長情況，研究S100A13基因高表達對甲狀腺癌TT細胞生長增殖的影響，探討S100A13基因在甲狀腺癌發(fā)生中的作用。
　　方法：應(yīng)用Lipofectamine2000將真核表達載體pcDNA3.2/V5/GW/D-S100A13和空載體pcDNA3.2/V5/GW/D導入甲狀腺癌TT細胞系，經(jīng)G418抗性篩選得到穩(wěn)定的克隆并

2、擴大培養(yǎng)成系。采用實時熒光定量RT-PCR和Western Blotting鑒定表達S100A13的TT細胞系，觀察轉(zhuǎn)染后TT細胞的生長情況并以相差顯微鏡照相，應(yīng)用細胞生長曲線法、MTT比色法、流式細胞術(shù)研究高表達S100A13基因?qū)T細胞生長速率和細胞周期的影響。
　　結(jié)果：成功建立了穩(wěn)定高表達S100A13基因的甲狀腺癌TT細胞系；轉(zhuǎn)染后TT-V5-S100A13組細胞生長明顯增快；分別將1×104個TT-V5-S100A1

3、3、TT-V5和TT細胞培養(yǎng)7天后，各組細胞數(shù)目分別為（2.01±0.05）×105、（0.89±0.04）×105和（0.81±0.03）×105(P<0.001)；MTT比色法示TT-V5-S100A13、TT-V5和TT細胞培養(yǎng)9天后相對增殖率分別為（92.11±0.51）％、（44.09±0.75）%、（45.01±0.65）%(P<0.001)。TT-V5-S100A13、TT-V5和TT經(jīng)流式細胞儀檢測S期的細胞比例分別為9

4、.12±0.32%、6.22±0.12%和6.18±0.13%(P<0.001),G2/M期的細胞比例分別為26.95±0.58%、11.33±0.39%和12.01±0.26%(P<0.001)。
　　結(jié)論：成功建立了帶V5小片段的pcDNA3.2載體的穩(wěn)定高表達S100A13基因的TT細胞系TT-V5-S100A13；穩(wěn)定高表達S100A13基因?qū)T細胞的生長有促進作用,能夠促進TT細胞周期從G0/G1期向S期及G2/M期過