雙色熒光示蹤膠質瘤原位移植模型的建立及其惡變的腫瘤間質細胞耐輻射特性的研究.pdf

1、第一部分雙色熒光示蹤膠質瘤原位移植模型的建立及其特征分析
　　目的:建立紅、綠雙色熒光示蹤的膠質瘤原位移植模型,并分析其實用價值。
　　方法:將發(fā)紅色熒光的C6膠質瘤細胞接種于綠色熒光裸小鼠腦內(nèi),動態(tài)活體熒光成像。實驗結束時,取全腦做連續(xù)冰凍切片,在普通光鏡、熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡下觀察移植瘤組織結構。
　　結果:活體熒光顯像分析顯示,接種腫瘤細胞的相應部位均可見到發(fā)紅色熒光的腫瘤團塊影存在,并且其大小隨著腫瘤移

2、植時間的延長而增大。在移植瘤組織冰凍切片中,可清晰顯示腫瘤組織中存在紅色、綠色和黃色等3種顏色的熒光細胞,并可在不同部位界定3種熒光細胞之間的位置關系;腫瘤細胞遷徙、定植及其與宿主細胞的融合等清晰可見;根據(jù)熒光顏色可以鑒別組成腫瘤血管的起源細胞是宿主細胞(綠色)、腫瘤細胞(紅色)或者是腫瘤細胞與宿主細胞融合(黃色)。此外,腫瘤周邊微環(huán)境中宿主固有的星形膠質細胞和少突膠質細胞被激活和去分化成Nestin陽性細胞。
　　結論:與傳統(tǒng)模

3、型比較,雙色熒光示蹤的膠質瘤原位移植模型在腫瘤活體成像及研究腫瘤細胞侵襲、轉移、腫瘤血管生成和腫瘤周邊微環(huán)境中宿主固有細胞被激活等方面,具有更高的實用價值。
　　第二部分膠質瘤干祖細胞誘導的腫瘤間質宿主惡變細胞耐輻射特性的初步研究
　　目的:課題組前期研究顯示膠質瘤腫瘤間質中源于宿主的細胞可被膠質瘤干祖細胞誘導惡變,但這些惡性轉化細胞對射線是否與膠質瘤干祖細胞一樣高度抵抗尚不明確,本文旨在初步探索這些惡變細胞對射線的敏感性及

4、可能的分子機制。
　　方法:連續(xù)多次輻射誘導,篩選并建立比膠質瘤干祖細胞 SU3更加耐輻射的SU3-5R細胞;分別將SU3、SU3-5R及 SU3誘導惡變的宿主少突膠質細胞 ihBTC2輻射,計算克隆形成率,繪制各細胞株放射劑量-存活曲線;熒光定量PCR檢測各細胞株輻射后Notch1 mRNA及Hes1 mRNA的表達水平;Western blot檢測ihBTC2細胞Notch信號通路下游輻射相關蛋白Bcl-2及pAkt表達水平。

5、
　　結果:膠質瘤間質宿主惡變細胞ihBTC2比耐輻射細胞SU3-5R更加輻射抵抗,表現(xiàn)為細胞增殖快,SF2值較高,輻射誘導性細胞凋亡壞死較低,輻射后Notch1、pAkt、Bcl-2表達水平顯著增高,而采用γ-分泌酶抑制劑(GSIs)阻斷Notch信號通路可提高其對射線的敏感性。
　　結論:在膠質瘤微環(huán)境中,腫瘤間質惡變的宿主少突膠質細胞ihBTC2對射線更加抵抗,可能與Notch信號通路激活密切相關,這對進一步研究腫瘤間