U251細胞系中腫瘤干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及原位移植瘤模型的建立.pdf

1、目的：本研究旨在從U251細胞系中分離、培養(yǎng)和鑒定腦腫瘤干細胞，觀察其生長特征，并初步比較它們和人胚胎神經(jīng)干細胞的異同。建立以U251細胞系來源的腦腫瘤干細胞為移植物的動物模型。為腦腫瘤干細胞的進一步研究打下基礎。 方法：應用簡化的無血清培養(yǎng)基和懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)U25l細胞，并將獲得的腦腫瘤干細胞接種于含血清培養(yǎng)基中觀察其分化；交替用含血清培基和無血清培基培養(yǎng)U251細胞，觀察其生長特性；利用人胚胎海馬組織分離和培養(yǎng)神經(jīng)干細胞作為

2、對照，觀察神經(jīng)干細胞和腦腫瘤干細胞在各方面的異同；用含DMSO的凍存液和液氮冷凍保存腦腫瘤干細胞；利用BrdU摻入實驗檢測腦腫瘤干細胞在形成克隆性細胞團過程中的增殖情況；用免疫熒光法檢測腦腫瘤干細胞在誘導分化前后表達神經(jīng)干細胞標志物CDl33、Nestin和成熟神經(jīng)細胞表型NeuN、NSE、GFAP、CNPase的情況；利用免疫磁珠分選方法分離原代腫瘤細胞中的CDl33陽性細胞，以觀察CDl33陽性和陰性腫瘤細胞在體外增殖；通過將腦腫瘤

3、干細胞移植入BALB／c裸鼠顱內(nèi)的方法建立原位移植瘤模型。 結(jié)果：U251細胞接種至無血清培養(yǎng)基后，部分細胞能夠存活并增殖為懸浮生長細胞球，并具有很強的自我更新和增殖能力；這種懸浮生長的細胞轉(zhuǎn)移到含血清培基中后可貼壁分化；U251細胞在含血清培基和無血清培基中交替培養(yǎng)時能夠快速轉(zhuǎn)換生長方式；可以通過細胞凍存與復蘇技術長期保存腦腫瘤干細胞，但對細胞活力有影響；腦腫瘤干細胞與神經(jīng)干細胞有很多相似性，但也在增殖能力、分化的細胞種類等方

4、面存在明顯區(qū)別；腦腫瘤干細胞中CDl33和Nestin表達陽性，腫瘤干細胞球中的部分細胞和腫瘤干細胞的分化腫瘤細胞均可以具有神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞的表型；以CDl33為標志物，利用免疫磁珠細胞分離技術可以獲得純度較高的、具有體外增殖的腦腫瘤干細胞；腦腫瘤干細胞可以在裸鼠顱內(nèi)導致腫瘤發(fā)生。 結(jié)論：U251人膠質(zhì)瘤細胞系中含一定比例腦腫瘤干細胞，此種細胞可在體外分離，培養(yǎng)和誘導分化；腦腫瘤干細胞具有自我更新和多向分化能力