脂肪肝中mfn2的表達(dá)變化及其對(duì)線粒體形態(tài)功能的影響.pdf

1、目的：1.研究脂肪肝中線粒體功能變化與mfn2基因表達(dá)的關(guān)系以及線粒體外形的動(dòng)態(tài)變化與能量產(chǎn)生之間的聯(lián)系。2. 研究外源性mfn2對(duì)脂肪肝細(xì)胞內(nèi)線粒功能的影響。
　　 方法：ob/ob小鼠建立脂肪肝模型，熒光素酶ADP/ATP 發(fā)光法檢測(cè)細(xì)胞中ATP產(chǎn)量，熒光探針DCFH-DA 測(cè)定ROS 生成水平；RT-PCR 測(cè)定mfn2基因轉(zhuǎn)錄，Western-blot 測(cè)定Mitofusin 2蛋白表達(dá)情況，原代細(xì)胞免疫細(xì)胞熒光共聚焦檢

2、測(cè)線粒體形態(tài)變化等指標(biāo)，與對(duì)照組比較并行相關(guān)性分析。利用脂質(zhì)體2000 將質(zhì)粒mfn2轉(zhuǎn)染LO2細(xì)胞，熒光素酶ADP/ATP 發(fā)光法檢測(cè)細(xì)胞中ATP 產(chǎn)量，熒光探針DCFH-DA 測(cè)定ROS 生成水平；RT-PCR 測(cè)定mfn2基因轉(zhuǎn)錄，Western-blot 測(cè)定Mitofusin 2蛋白表達(dá)情況，JC-1 標(biāo)記細(xì)胞線粒體，在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)線粒體跨膜電位(ψ m △)的變化。
　　 結(jié)果：在脂肪肝中，ATP 生成率下降，R

3、OS 產(chǎn)物增多，mitofusin2表達(dá)低于對(duì)照組肝組織，且在轉(zhuǎn)錄水平(mfn2)出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)。轉(zhuǎn)染mfn2基因的LO2細(xì)胞可以穩(wěn)定表達(dá)mfn2蛋白，在脂肪肝誘導(dǎo)的情況下,轉(zhuǎn)染組ATP 水平高于對(duì)照組，ROS 低于對(duì)照組，線粒體跨膜電位下降幅度少。
　　 結(jié)論：脂肪肝中mitofusin2 下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞中線粒體融合出現(xiàn)障礙，形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為線粒體從絲狀網(wǎng)絡(luò)斷裂成點(diǎn)狀碎片，功能學(xué)上提示線粒體代謝出現(xiàn)障礙。而在細(xì)胞試驗(yàn)中上調(diào)mfn2基