CtBP2-ROCK通路調(diào)節(jié)前列腺癌細(xì)胞侵襲.pdf

1、目的：
　　明確CTBP2表達水平及位置改變對前列腺癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響，并初步探討其分子機制。
　　方法：
　　運用免疫組織化學(xué)檢測CTBP2在前列腺增生與前列腺癌組織中的表達水平及位置改變;分別用westernblot與RT-qPCR檢測CTBP2在正常前列腺細(xì)胞RWPE-1與前列腺癌細(xì)胞PC3中的蛋白水平與mRNA表達量，利用免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡檢測CTBP2在這些細(xì)胞中的位置改變;構(gòu)建CTBP2表達

2、質(zhì)粒，并用其轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)擴增后提取高濃度質(zhì)粒，隨后將其轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞中，經(jīng)G418篩選及單克隆細(xì)胞培養(yǎng)后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株;分別應(yīng)用RT-qPCR及Westernblot驗證轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中CtBP2的mRNA表達量以及蛋白水平;使用MTT法檢測CTBP2高表達前列腺癌細(xì)胞增殖能力變化，Transwell法檢測CTBP2高、低表達前列腺癌細(xì)胞侵襲能力變化，磷脂酰絲氨酸外翻法分析(AnnexinⅤ)檢測CTBP2高、低表達前列腺癌細(xì)胞凋亡

3、改變;利用RT-qPCR檢測可能受CTBP2調(diào)節(jié)的侵襲相關(guān)分子mRNA表達量，進一步運用westernblot驗證RT-qRCR所得結(jié)果及該效應(yīng)分子下游靶蛋白的改變。整理數(shù)據(jù)，所有需要統(tǒng)計分析的實驗結(jié)果均運用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　前列腺癌組織中CTBP2蛋白水平增加，且與腫瘤分期、gleason評分成正相關(guān)，CTBP2在前列腺增生組織及局限性前列腺癌組織中主要位于細(xì)胞核中，而在轉(zhuǎn)移性前列腺癌組織胞漿中也

4、出現(xiàn);與正常前列腺細(xì)胞RWPE-1相比，前列腺癌細(xì)胞PC3中CTBP2 mRNA表達量與蛋白水平增加，在RWPE-1中CTBP2主要位于細(xì)胞核中，而其在PC3細(xì)胞核與細(xì)胞漿中均表達;取CTBP2表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)擴增后成功提取高濃度質(zhì)粒;通過脂質(zhì)體介導(dǎo)將CTBP2表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞，經(jīng)G418篩選與單克隆細(xì)胞培養(yǎng)獲得CTBP2穩(wěn)定表達細(xì)胞株，并驗證該細(xì)胞株CTBP2穩(wěn)定高表達;細(xì)胞生物學(xué)行為檢測表明CTBP2高表達可顯著提

5、高前列腺癌細(xì)胞侵襲能力，但對細(xì)胞增殖與凋亡無顯著影響;而CTBP2低表達可顯著降低細(xì)胞侵襲能力，增加細(xì)胞凋亡。RT-qPCR發(fā)現(xiàn)CTBP2低表達可降低前列腺癌細(xì)胞中ROCK1表達，westernblot檢測也發(fā)現(xiàn)CTBP2低表達細(xì)胞中ROCK1蛋白水平降低，這與RT-qRCR結(jié)果一致。Westernbolt檢測發(fā)現(xiàn)ROCK1下游信號分子p-MLC與c-Myc蛋白水平也降低，且c-Myc下游分子HSPC111蛋白含量降低。
　　結(jié)論