HERG在不同分類骨腫瘤中的表達(dá)及其對骨肉瘤細(xì)胞系增殖影響的研究.pdf

1、背景:HERG(Humanether-à-gò-gò-relatedgene)最早在豚鼠心肌細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，之后發(fā)現(xiàn)其存在于多種不同種類動(dòng)物的心肌細(xì)胞中。HERG基因是進(jìn)化保守的、電壓門控外向整流鉀離子通道的EAG(ether-à-gò-gò)家族成員之一，其編碼的HERG鉀通道是一種特殊類型的鉀通道，具有內(nèi)向整流特性。大量研究表明，HERG選擇性表達(dá)于多種組織來源的腫瘤細(xì)胞，對腫瘤的生物學(xué)行為產(chǎn)生廣泛的影響，與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、分化及

2、侵襲性密切相關(guān)，而在相應(yīng)來源的正常細(xì)胞中不表達(dá)。其在腫瘤中的選擇性表達(dá)可能代表了腫瘤細(xì)胞生長和腫瘤發(fā)展的有利因素，具有潛在的重要臨床應(yīng)用價(jià)值。最近，阻斷鉀離子通道對影響腫瘤細(xì)胞增殖情況的研究已經(jīng)成為熱點(diǎn)，HERG有可能通過其表達(dá)的電壓門控性鉀離子通道，影響腫瘤細(xì)胞的膜電位，從而有助于腫瘤細(xì)胞的存活和增殖，但具體機(jī)制尚不明了，另外其在骨科常見腫瘤中的表達(dá)情況及其與骨科惡性腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系，尚缺乏充足的研究。
　　目的:本研究旨在探

3、討HERG在不同分類骨科常見腫瘤組織標(biāo)本及其在骨肉瘤細(xì)胞系MG-63、SOSP-9607、Saos-2中的表達(dá)情況，分析HERG在骨肉瘤細(xì)胞系及臨床標(biāo)本中的表達(dá)與腫瘤病人臨床病理學(xué)特征之間有無關(guān)聯(lián)，探索HERG蛋白在不同骨腫瘤中的表達(dá)水平，以探求其與腫瘤分化程度，惡性程度之間的關(guān)系。同時(shí)驗(yàn)證對其抑制可對骨肉瘤細(xì)胞系增殖產(chǎn)生的影響。以期為未來骨腫瘤的臨床診斷與治療，尤其是化療能夠有一定的指導(dǎo)性作用。
　　方法:1、經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會通

4、過和病人同意，根據(jù)常見骨腫瘤分類表選取臨床骨腫瘤病例組織標(biāo)本60例，歸納整理。2、相同病例經(jīng)組織切片，免疫組化染色，鏡下觀察HERG表達(dá)水平。3、分別提取臨床各個(gè)標(biāo)本組織mRNA，RT-PCR方法觀察其HERG表達(dá)水平差異。4、臨床組織標(biāo)本提取總蛋白，Westernblot觀察其HERG蛋白表達(dá)水平。5、復(fù)蘇培養(yǎng)骨肉瘤細(xì)胞系MG63、SOSP-9607、Saos-2，提取mRNA，RT-PCR方法檢測其HERG表達(dá)水平。6、非特異性鉀離

5、子通道抑制劑4-AP，HERG抑制劑E-4031不同濃度作用于三株細(xì)胞系，MTT法檢測其增殖變化。
　　結(jié)果:1、臨床標(biāo)本資料經(jīng)歸納整理，得到病例共60例，經(jīng)我科手術(shù)室采集于2007年-2009年。其中男性38例，女性22例。經(jīng)分析歸納整理，其中良性25例，惡性35例，詳情見下文。2、免疫組化染色顯示：不同惡性程度的腫瘤HERG的表達(dá)水平和位置有所不同，正常骨組織中不表達(dá)。3、RT-PCR結(jié)果顯示：在半定量程序幫助下，可觀察到HE

6、RG在正常骨組織中無表達(dá)，而其mRNA在臨床標(biāo)本中表達(dá)水平與腫瘤起源、惡性程度有關(guān)的結(jié)果。4、WesternBlot顯示蛋白水平表達(dá)與腫瘤惡性程度有關(guān)。5、RT-PCR顯示：骨肉瘤細(xì)胞系MG63、SOSP-9607、Saos-2中HERG均有較高程度的表達(dá)。6、將不同濃度的通道抑制劑分別加入三株人骨肉瘤細(xì)胞系培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48h后，MTT法檢測各組A值的變化，可以評價(jià)不同的鉀離子通道抑制劑對人骨肉瘤細(xì)胞生長的抑制作用，結(jié)果是特異性的HE

7、RG通道抑制劑E—4031對三株骨肉瘤細(xì)胞系的增殖沒有明顯的影響，而非特性的Kv通道抑制劑4-AP藥物濃度在3mmol和5mmol時(shí)對細(xì)胞增殖影響明顯，有顯著性意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:HERG參與了許多骨腫瘤的發(fā)生、生長與演變，其表達(dá)水平隨著腫瘤的起源不同，惡性程度不同而存在差異，許多骨腫瘤都是HERG基因表達(dá)的潛在靶點(diǎn)。而在良性或低度惡性的腫瘤中，HERG不表達(dá)或者低度表達(dá)。只有在為數(shù)不多的少數(shù)幾種良性病變中有較低程度