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文檔簡介
1、目的:探討化療藥順鉑和阿霉素損傷人U2骨肉瘤細胞(U2-OS)后p53、bcl-2、c-myc基因表達情況的變化及其誘導細胞周期阻滯及凋亡的情況,為骨肉瘤化療耐藥的解決提供理論依據(jù)。 方法:分別使用0.3、3.0、30μg/ml順鉑、0.06、0.6、6.0μg/ml阿霉素作用于U2-OS細胞2h后繼續(xù)培養(yǎng)0、6、12、24、48h,采用噻唑蘭比色法(MTT法)檢測U2-OS細胞生長抑制率。流式細胞術(shù)、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT
2、-PCR)、蛋白免疫印跡(WesternBlot)檢測順鉑和阿霉素損傷后繼續(xù)培養(yǎng)6、24h后細胞細胞周期變化、凋亡率及p53、bcl-2、c-myc基因表達情況。 結(jié)果:不同濃度順鉑、阿霉素損傷U2-OS細胞后繼續(xù)培養(yǎng)6h,流式細胞術(shù)檢測各組G1期細胞分別為67.97%、79.64%、78.09%、80.21%、78.25%、79.13%、79.92%,而p53基因mRNA和蛋白表達和空白對照組比較均增加,bcl-2、c-myc
3、的表達和空白對照組比較無變化,細胞生長抑制率無明顯統(tǒng)計學差異;繼續(xù)培養(yǎng)24h,②、③、④、⑤、⑥、⑦組細胞生長抑制率分別為31.58%、44.12%、59.46%、23.40%、40.31%、57.56%,②、③、④組之間,⑤、⑥、⑦組之間有明顯組間差異;流式細胞術(shù)檢測④、⑦組細胞凋亡率分別為10.04%、14.55%,細胞周期以G2期細胞為主。②、③、④組p53、bcl-2和c-mycmRNA及蛋白表達有組間差異,⑤、⑥、⑦組p53、
4、bcl-2和c-mycmRNA及蛋白表達有組間差異。繼續(xù)培養(yǎng)48h,各組細胞生長抑制率增高。 結(jié)論:不同濃度的順鉑和阿霉素短時間(2h)損傷U2-OS細胞仍有細胞增殖抑制作用,這種作用與細胞DNA損傷后p53、bcl-2、c-myc基因表達變化有關(guān);U2-OS細胞DNA損傷后6h即表現(xiàn)出明顯的p53基因的表達增強并誘導G1期細胞周期阻滯;繼續(xù)培養(yǎng)24h,p53、bcl-2、c-myc基因表達變化與藥物濃度有關(guān)聯(lián)且誘導G2細胞周期
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